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葡糖基转移酶在发酵奶基产品中提供改善的质地的用途的制作方法 (基团转移酶)

来源: 浏览: 30次  更新时间:2021-12-12 21:33

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基团转移酶

葡糖基变化酶在发酵奶基产品中供给革新的质量的用途的创造办法



背景本领:

花色素葡糖基转移酶

质量是怪僻发酵乳成品(如酸奶和发酵奶)的闭头品质和价格参数。与消耗者饮食感触有闭的酸奶质量严沉效率消耗者的感知。当前宁静剂(比方淀粉)是酸奶中常睹的增添剂可巩固质量。然而网站提交入口可巩固质量。然而含淀粉的酸奶在加工功夫须要特别处置免得因剪切力而遗失由淀粉爆发的质量。淀粉的运用还减少了酸奶的费用。其他妇孺皆知淀粉以多种办法闭于酸奶爆发背后效率。开始淀粉缩小了酸奶的“光彩”给消耗者的视觉感知戴来背后效率。其他增添的淀粉常常引导酸奶的不憧憬的感官搞燥。

葡糖基转移酶名词解释

除淀粉外酸奶中蛋白质程度易脂肪程度也会明显效率质量。其他脂肪程度也会效率味道。变化蛋白质程度大概脂肪程度是一种与酸奶的成本特性和养分特性符合合的办法。当缩小个中所有一种的含量时常常运用其他因素来补充质量大概味道破坏常睹干法是经过增添淀粉等因素。

葡聚糖糖尿病能吃吗

须要在不包括增添淀粉大概其他宁静剂的情景下为发酵乳成品增添质量。

糖基转移酶市场



本领实行因素:

β葡聚糖

依据本创造的一个方面提出了一种制备具备革新的质量的酸奶产品的办法革新的质量为减少的厚度和/大概口感所述办法具备以下办法:供给奶;向所述奶中增添蔗糖以产生增甜奶(sweetenedmilk);使所述增甜奶与葡糖基变化酶交战以产生不溶性葡萄糖会合物;接种起子培养物;以及发酵以供给所述具备革新的质量的酸奶产品所述革新的质量为减少的厚度和/大概减少的口感。

糖基转移酶功能

任选地所述奶是牛奶。任选地所述奶选自在以下构成的组:生奶、预巴氏杀菌的奶、全脂奶、脱脂奶(skimmilk)、复本奶、乳糖酶处置的奶、降乳糖奶、无乳糖奶和炼奶。任选地所述奶是生奶。

任选地所述办法具备将所述奶均质化和巴氏杀菌的特殊的办法。任选地所述与葡糖基变化酶交战的办法在均质化和巴氏杀菌办法之降后行。任选地所述与葡糖基变化酶交战的办法在均质化和巴氏杀菌办法之进步辇儿。

任选地增添所述蔗糖以产生约0.1%至12%(w/w)。任选地增添所述蔗糖以产生约2%至8%(w/w)。任选地增添所述蔗糖以产生约4%至6%(w/w)。

任选地所述葡糖基变化酶是与选自在以下构成的组的酶具备起码70%序列普遍性的酶:gtfj(seqidno:1)、gtf300(seqidno:2)、gtf0874(seqidno:3)、gtf6855(seqidno:4)、gtf2379(seqidno:5)、gtf7527(seqidno:6)、gtf1724(seqidno:7)、gtf0544(seqidno:8)、gtf5926(seqidno:9)、gtf4297(seqidno:10)、gtf5618(seqidno:11)、gtf2765(seqidno:12)、gtf2919(seqidno:13)、gtf2678(seqidno;14)、和gtf3929(seqidno:15)。任选地所述葡糖基变化酶是与选自在以下构成的组的酶具备起码80%序列普遍性的酶:gtfj(seqidno:1)、gtf300(seqidno:2)、gtf0874(seqidno:3)、gtf6855(seqidno:4)、gtf2379(seqidno:5)、gtf7527(seqidno:6)、gtf1724(seqidno:7)、gtf0544(seqidno:8)、gtf5926(seqidno:9)、gtf4297(seqidno:10)、gtf5618(seqidno:11)、gtf2765(seqidno:12)、gtf2919(seqidno:13)、gtf2678(seqidno;14)、和gtf3929(seqidno:15)。任选地所述葡糖基变化酶是与选自在以下构成的组的酶具备起码90%序列普遍性的酶:gtfj(seqidno:1)、gtf300(seqidno:2)、gtf0874(seqidno:3)、gtf6855(seqidno:4)、gtf2379(seqidno:5)、gtf7527(seqidno:6)、gtf1724(seqidno:7)、gtf0544(seqidno:8)、gtf5926(seqidno:9)、gtf4297(seqidno:10)、gtf5618(seqidno:11)、gtf2765(seqidno:12)、gtf2919(seqidno:13)、gtf2678(seqidno;14)、和gtf3929(seqidno:15)。任选地所述葡糖基变化酶是与选自在以下构成的组的酶具备起码95%序列普遍性的酶:gtfj(seqidno:1)、gtf300(seqidno:2)、gtf0874(seqidno:3)、gtf6855(seqidno:4)、gtf2379(seqidno:5)、gtf7527(seqidno:6)、gtf1724(seqidno:7)、gtf0544(seqidno:8)、gtf5926(seqidno:9)、gtf4297(seqidno:10)、gtf5618(seqidno:11)、gtf2765(seqidno:12)、gtf2919(seqidno:13)、gtf2678(seqidno;14)、和gtf3929(seqidno:15)。任选地所述葡糖基变化酶选自在以下构成的组:gtfj(seqidno:1)、gtf300(seqidno:2)、gtf0874(seqidno:3)、gtf6855(seqidno:4)、gtf2379(seqidno:5)、gtf7527(seqidno:6)、gtf1724(seqidno:7)、gtf0544(seqidno:8)、gtf5926(seqidno:9)、gtf4297(seqidno:10)、gtf5618(seqidno:11)、gtf2765(seqidno:12)、gtf2919(seqidno:13)、gtf2678(seqidno;14)、和gtf3929(seqidno:15)。任选地所述葡糖基变化酶是gtfj(seqidno:1)。

任选地所述葡糖基变化酶以约0.005mg/100ml奶至15mg/100ml奶的量存留于所述奶中。任选地所述葡糖基变化酶以约0.03mg/100ml奶至约12.5mg/100ml奶的量存留。

任选地所述gtfj以约0.033mg/100ml奶至约12.5mg/100ml奶的量存留。任选地所述gtfj以约0.3mg/100ml奶至约5.0mg/100ml奶的量存留。

任选地所述葡糖基变化酶是gtf300(seqidno:2)。任选地所述gtf300以约0.033mg/100ml至约12.5mg/100ml奶的量存留。任选地所述gtf300以约1.25mg/100ml奶至约5mg/100ml奶的量存留。

任选地所述减少的质量是减少的厚度。任选地与闭于仿造品(不加gtf酶)比拟所述厚度减少30%大概更多。任选地所述厚度减少50%大概更多。任选地所述厚度减少70%大概更多。任选地所述厚度减少90%大概更多。任选地所述厚度减少100%大概更多。任选地所述厚度减少110%大概更多。任选地所述厚度减少120%大概更多。

任选地所述减少的质量是减少的口感。任选地与闭于仿造品(不加gtf酶)比拟所述口感减少30%大概更多。任选地所述口感减少50%大概更多。任选地所述口感减少70%大概更多。任选地所述口感减少90%大概更多。任选地所述口感减少100%大概更多。任选地所述口感减少110%大概更多。任选地所述口感减少120%大概更多。

任选地所述办法包括以下的进一步办法:将所述酸奶冷却至5℃至10℃的温度以供给冷冻的酸奶;以及将所述冷冻的酸奶倒入预成型的容器中。任选地所述容器供给一人份的酸奶。

任选地所述奶是矮脂奶以供给矮脂酸奶。任选地所述奶是脱脂奶(non-fatmilk)以供给脱脂酸奶(non-fatyogurt)。

任选地将所述奶的蛋白质含量安排至起码约3%(w/w)。任选地将所述奶的蛋白质含量安排至起码约3.5%。任选地将所述奶的蛋白质含量安排至起码约3.7%(w/w)。任选地将所述奶的蛋白质含量安排至起码约3.8%(w/w)。任选地将所述奶的蛋白质含量安排至起码约3.9%(w/w)。任选地将所述奶的蛋白质含量安排至起码约4.0%(w/w)。

依据本创造的一个方面提出了一种依据所有大概前述办法制备的酸奶。任选地所述酸奶含有果胶。

附图证明

图1刻画了用培养物接种奶以及用gtf酶处置的过程图。

图2刻画了运用以下三种不共的起子培养物5黎明经gtf300处置的酸奶和闭于照酸奶的厚度和口感:图2a(yo-mix860)、图2b(yo-mix495)和图2c(yo-mix465)。

图3刻画了在运用以下三种不共的起子培养物进行培养接种而且共时增添gtf300的28黎明经酶处置的酸奶和闭于照酸奶的厚度和口感:图3a(yo-mix860)、图3b(yo-mix495)和图3c(yo-mix465)。

图4刻画了在巴氏杀菌和均质化之前增添酶的过程图。

图5刻画了运用以下四种不共的起子培养物在巴氏杀菌和均质化之前增添酶的7黎明经gtf300处置的酸奶和闭于照酸奶的厚度和口感:图5a(yo-mix495)、图5b(yo-mix465)、图5c(yo-mix860)和图5d(yo-mix204)。

图6刻画了运用以下四种不共的起子培养物在巴氏杀菌和均质化之前增添gtf300的28黎明经酶处置的酸奶和闭于照酸奶的厚度和口感:图6a(yo-mix860)、图6b(yo-mix495)、图6c(yo-mix465)和图6d(yo-mix204)。

图7a(2%蔗糖)和7b(4%蔗糖):在巴氏杀菌和均质化之前增添gtf300评价的厚度和口感。

图8刻画了酸奶冷却至不共温度闭于弥补后gtf300爆发的质量和口感的效率。

图9刻画了gtfj闭于厚度和口感的效率。图9a示出了随酶浓度变革的gtfj的效率而且图9b示出了与不加酶的4%蛋白质酸奶比拟的3.7%蛋白质加gtfj的效率。

图10刻画了加有在水中0.2%剂量的gtf300的在水中的5%蔗糖大概在水中的5%蔗糖和5%乳糖的色谱图提取物。

以电子办法递接的序列表的引用

所述序列表的官方副本经过efs-web动作ascii方法的序列表以电子办法提接其文件名为20180703_nb41287_st25.txt创造于2018年7月3日且具备174千字节的大小并与本证明书籍共时提接。包括在该ascii方法的文件中的序列表是本证明书籍的一局部而且经过引用以其全文并入本文。

序列id简述

seqidno:1是gtfj的氨基酸序列。

seqidno:2是gtf300的氨基酸序列。

seqidno:3是gtf0874的氨基酸序列。

seqidno:4是gtf6855的氨基酸序列。

seqidno:5是gtf2379的氨基酸序列。

seqidno:6是gtf7527的氨基酸序列。

seqidno:7是gtf1724的氨基酸序列。

seqidno:8是gtf0544的氨基酸序列。

seqidno:9是gtf5926的氨基酸序列。

seqidno:10是gtf4297的氨基酸序列。

seqidno:11是gtf5618的氨基酸序列。

seqidno:12是gtf2765的氨基酸序列。

seqidno:13是gtf2919的氨基酸序列。

seqidno:14是gtf2678的氨基酸序列。

seqidno:15是gtf3929的氨基酸序列。

简直实行办法

本创造的留神证明:

除非另有证明本创造培养的试验将运用在本范围本领范畴内的分子生物学(包括沉组本领)、微生物学、细胞生物学和生去世学的常规本领。此类本领在以下文件中赢得充溢解释比方molecularcloning:alaboratorymanual[分子克隆:试验室手册],第二版(sambrook等人,1989);oligonucleotidesynthesis[鳏核苷酸合成](m.j.gait编写,1984;currentprotocolsinmolecularbiology[分子生物学姑且筹备](f.m.ausubel等人,编写,1994);pcr:thepolymerasechainreaction[pcr:会合酶链式反应](mullis等人,编写,1994);genetransferandexpression:alaboratorymanual[基因变化和表达:试验室手册](kriegler,1990)和thealcoholtextbook[醇教科书籍](ingledew等人,编写,第五版,2009)以及essentialsofcarbohydratechemistryandbiochemistry[碳水化合去世学与生去世学前提](lindhorste,2007)。

除非在本文中另有定义本文所用的理想本领术语和科学术语具备与本创造培养所属范围的普遍本领人员常常所领会的沟通含意。singleton等人,dictionaryofmicrobiologyandmolecularbiology[微生物学和分子生物学词汇典]第二版,johnwileyandsons[约翰威利父子公司],纽约(1994)以及hale和markham,theharpercollinsdictionaryofbiology[哈珀柯林斯生物学词汇典],harperperennial[哈珀长久出书社],纽约(1991)为本领人员供给了本创造中所运用的许多术语的通用词汇典。与本文所述的那些好像大概等效的所有办法和材料可用于本创造培养的试验大概尝试中。

本文供给的数值范畴包括规定所述范畴的数值在内。

定义:

如本文所运用的“α(1-3)葡聚糖”是指在葡萄糖单体之间含有α1-3键的鳏糖大概多糖。

术语“葡糖基变化酶(glucosyltransferase大概glucosyltransferaseenzyme)”、“gtf酶”、和“gtf”在本文可调换运用。葡糖基变化酶催化从蔗糖合成名为葡聚糖的高分子量d-葡萄糖会合物。依据cazy(碳水化合物活性酶)数据库(cantarel等人,nucleicacidsres.[核酸探究]37:d233-238,2009)将gtf酶分类在糖苷水解酶家眷70(gh70)下。

闭于多肽术语“野生型”、“亲本”大概“参比”是指在一个大概多个氨基酸地位处不包括报酬代替、插入大概缺失的天然存留的多肽。好像地闭于多核苷酸术语“野生型”、“亲本”大概“参比”是指不包括报酬核苷酸变革的天然存留的多核苷酸。然而注沉编码野生型、亲本、大概参比多肽的多核苷酸不限于天然存留的多核苷酸而且涵盖编码野生型、亲本、大概参比多肽的所有多核苷酸。

参比野生型多肽应领会为包括多肽的老练办法。“老练”多肽大概其变体是个中不存留旗号序列的多肽大概变体比方在多肽表白功夫大概之后从未老练办法的多肽切割。

闭于多肽术语“变体”是指与指定的野生型、亲本大概参比多肽不共的多肽因为它包括一种大概多种天然存留的大概报酬的氨基酸代替、插入大概缺失。好像地闭于多核苷酸术语“变体”是指在核苷酸序列中与指定的野生型、亲本大概参比多核苷酸不共的多核苷酸。野生型、亲本大概参比多肽大概多核苷酸的个性将从左右文中不言而喻。

术语“沉组”当用于提及中心细胞、核酸、蛋白质大概载体时表明受试者已经从其天然状况被掩饰。因此比方沉组细胞表白在天然(非沉组)办法的细胞中未创造的基因大概以不共于天然界创造的程度大概在不共于天然界创造的前提下表白天然基因。沉组核酸与天然序列不共在于一个大概多个核苷酸和/大概灵验地对接到异源序列比方表白载体中的异源开用子。沉组蛋白质与天然序列的不共可在于一个大概多个氨基酸和/大概与异源序列混共。包括编码葡糖基变化酶的核酸的载体是沉组载体。

术语“接收的”、“分别的”和“径自的”是指从如天然存留的与其天然相闭的起码一种其他材料大概组分中取消的化合物、蛋白质(多肽)、细胞、核酸、氨基酸、大概者其他指定材料大概组分。其“分别的”多肽包括然而不限于含有在异源宿主细胞中表白的渗透多肽的培养液。

术语“会合物”是指对接在所有的一系列单体基团。会合物由单个单体的多个单元构成。如本文所运用的术语“葡萄糖会合物”是指动作会合物对接在所有的葡萄糖单元。只要存留起码三个葡萄糖单元葡萄糖会合物便不妨含有非葡萄糖的糖比方乳糖大概半乳糖。

术语“氨基酸序列”与术语“多肽”“蛋白质”和“肽”共义而且可调换地运用。当此类氨基酸序列表展现活性时它们不妨被称为“酶”。运用针闭于氨基酸残基的常规单字母大概三字母暗号采用尺度氨基端-至-羧基端取向(即n→c)展现氨基酸序列。

术语“核酸”涵盖不妨编码多肽的dna、rna、异源双链体、以及合因素子。核酸不妨是单链的大概双链的而且不妨是化学掩饰。术语“核酸”和“多核苷酸”可调换地运用。因为遗传暗号是简并的不妨运用多于一个暗号子来编码简直的氨基酸而且本创造的拉拢物和办法涵盖编码简直氨基酸序列的核苷酸序列。除非另有证明核酸序列以5′-至-3′取向出现。

闭于细胞运用的术语“变化”“宁静变化”和“转基因”意指细胞包括安排到其基因组中大概动作经过多代贯串的附加体的非天然(比方异源)核酸序列。

在将核酸序列插入细胞的左右文中术语“引入”意指本范围已知的“转染”、“变化”大概“转导”。

“宿主菌株”大概“宿主细胞”是已经引入了表白载体、噬菌体、病毒大概其他dna建立体包括编码手段多肽(比方葡糖基变化酶)的多核苷酸的生物体。示例性宿主菌株是不妨表白手段多肽的微生物细胞(比方细菌、丝状真菌和酵母)。术语“宿主细胞”包括从细胞爆发的本生质体。

闭于多核苷酸大概蛋白质的术语“异源”是指不是天然存留于宿主细胞中的多核苷酸大概蛋白质。

闭于多核苷酸大概蛋白质的术语“内源”是指天然存留于宿主细胞中的多核苷酸大概蛋白质。

术语“表白”是指基于核酸序列爆发多肽的过程。所述过程包括转录和翻译二者。

“采用性标记”大概“可采用标记”是指不妨在宿主中被表白以促进采用携戴所述基因的宿主细胞的基因。可采用标记的实例包括然而不限于在宿主细胞上赋予代谢上风(如养分上风)的抗微生物剂(比方潮霉素、博来霉素大概氯霉素)和/大概基因。

“载体”是指安排用于将核酸引入一种大概多种细胞典型的多核苷酸序列。载体包括克隆载体、表白载体、穿梭载体、质粒、噬菌体颗粒、盒等。

“表白载体”是指包括编码手段多肽的dna序列的dna建立体所述编码序列与不妨在符合的宿主中效率dna表白的符合控制序列灵验地对接。此类控制序列不妨包括效率转录的开用子控制转录的任选的安排子序列编码mrna上符合的核糖体共同位点的序列巩固子以及控制转录和翻译中断的序列。

术语“灵验地对接”意指:指定组分处于答应它们以预期办法起效率的闭系(包括然而不限于并列)。比方调控序列与编码序列灵验地对接使得编码序列的表白受调控序列的控制。

“旗号序列”是与蛋白质的n-终局局部附接的氨基酸序列所述氨基酸序列有用处蛋白质在细胞外的渗透。细胞外的蛋白质的老练办法缺乏在渗透过程中被切除的旗号序列。

“生物学活性的”是指具备指定生物活性比方酶活性的序列。

术语“比活性”是指在特定前提下每单元时间经过酶大概酶制剂可变化为产品的底物的摩尔数。比活性常常展现为单元(u)/mg蛋白质。

如本文所运用的“序列普遍性百分比”意指当使东西备默认参数的clustalw算法比闭于时特定序列具备与指定的参比序列中的氨基酸残基沟通的起码必定百分比的氨基酸残基。参睹thompson等人(1994)nucleicacidsres.[核酸探究]22:4673-4680。clustalw算法的默认参数是:

与参比序列比拟缺失被视为不普遍的残基。包括在职一终局爆发的缺失。比方相闭于于老练多肽具备老练617残基多肽的c-终局的五个氨基酸缺失的变体将具备99%的序列普遍性百分比(612/617沟通的残基×100四舍五入到最亲近的整数)。此类变体将被与老练多肽具备“起码99%序列普遍性”的变体所涵盖。

“混共”多肽序列经过二个受试多肽序列之间的肽键对接即灵验地对接。

术语“丝状真菌”是指十脚丝状办法的真菌亚门(eumycotina)特别是子囊菌亚门(pezizomycotina)物种。

术语“约”是指参照值的±5%。

“乳糖酶处置的奶(lactasetreatedmilk)”意指经乳糖酶处置以缩小乳糖量的奶。

“降乳糖奶(reducedlactosemilk)”意指个中乳糖的百分比为约2%大概更矮的奶。

“无乳糖奶”意指个中乳糖的百分比为约0.5%大概更矮的奶。

术语“gtfj”意指具犹如seqidno:1所示的序列的葡糖基变化酶。

术语“gtf300”意指具犹如seqidno:2所示的序列的葡糖基变化酶。

如本文所运用的术语酸奶大概发酵奶成品的“质量”意指酸奶厚度和/大概口感的感官知觉大概二者。质量的“革新”意指厚度减少和/大概口感的感官知觉巩固大概二者。除非另有证明如本文所运用的酸奶大概发酵奶饮料的“厚度”意指以10hz的剪切速率提取的表瞅黏度。因此在10hz的剪切速率下表瞅黏度的减少表明厚度的减少。以200hz的剪切速率提取的表瞅黏度与“口感”相闭。因此在200hz的剪切速率下表瞅黏度的减少表明口感的减少。

特殊的渐变

在一些实行例中本创造的葡糖基变化酶进一步包括可供给其他的本能大概宁静性便宜的一个大概多个渐变。示例性的本能便宜包括然而不限于:减少的热宁静性、减少的埋躲宁静性、减少的融化度、变化的ph曲线、减少的比活性、经掩饰的底物奇异性、经掩饰的底物共同、经掩饰的ph依附性活性、经掩饰的ph依附性宁静性、减少的氧化宁静性、和减少的表白。在一些情景下本能便宜是在相闭于较矮的温度下实行的。在一些情景下本能便宜是在相闭于较高的温度下实行的。

其他本创造的葡糖基变化酶不妨包括所罕见手段顽固氨基酸代替。下表中列出了示例性顽固氨基酸代替。

顽固氨基酸代替

读者将领会一些前述顽固渐变不妨经过遗传安排爆发而其他经过用遗传大概其他办法将合成的氨基酸引入多肽中爆发。

本创造的葡糖基变化酶不妨是“前体”、“未老练”大概“全长”的在这种情景下它们包括旗号序列;大概“老练”的在这种情景下它们缺乏旗号序列。老练办法的多肽常常是最有用的。除非另有证明不然本文运用的氨基酸残基编号是指相应葡糖基变化酶多肽的老练办法。只要所得的多肽保持葡糖基变化酶活性本创造的葡糖基变化酶多肽也可被截短以去除n-终局大概c-终局。

本创造的葡糖基变化酶不妨是“嵌合”大概“杂合”多肽因为其包括第一葡糖基变化酶多肽的起码一局部和第二葡糖基变化酶多肽的起码一局部。本创造的葡糖基变化酶多肽可进一步包括异源旗号序列即答应追踪大概纯化等的表位。示例性异源旗号序列来自地衣芽孢杆菌(b.licheniformis)淀粉酶(lat)、枯草芽孢杆菌(b.subtilis)(amye大概apre)、和链霉菌属(streptomyces)cela。

葡糖基变化酶的爆发

本创造的葡糖基变化酶不妨在宿主细胞中爆发比方经过度泌大概细胞内表白。在将葡糖基变化酶渗透到细胞培养基中后不妨赢得包括葡糖基变化酶的培养细胞材料(比方全细胞培养液)。任选地葡糖基变化酶不妨从宿主细胞平分别大概以至从细胞培养液平分别这取决于最后葡糖基变化酶所需的纯度。不妨依据本范围熟知的办法克隆和表白编码葡糖基变化酶的基因。适合的宿主细胞包括细菌、真菌(包括酵母和丝状真菌)和植物细胞(包括藻类)。特别有用的宿主细胞包括黑曲霉(aspergillusniger)、米曲霉(aspergillusoryzae)大概里氏木霉(trichodermareesei)。其他宿主细胞包括细菌细胞比方枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)大概地衣芽孢杆菌(b.licheniformis)以及链霉菌属(streptomyces)和大肠杆菌(e.coli)。

宿主细胞还不妨表白编码共源大概异源葡糖基变化酶(即与宿主细胞不共物种的葡糖基变化酶)大概一种大概多种其他酶的核酸。葡糖基变化酶不妨是变体葡糖基变化酶。其他宿主不妨表白一种大概多种辅酶、蛋白质、肽。

载体

不妨建立包括编码葡糖基变化酶的核酸的dna建立体以在宿主细胞中表白。因为遗传暗号中熟知的简并性编码沟通氨基酸序列的变体多核苷酸不妨用常规本领进行安排和制备。优化用于特定宿主细胞的暗号子也是本范围熟知的。不妨将编码葡糖基变化酶的核酸掺入载体。不妨运用熟知的变化本领(比方以下果然的那些)将载体变化至宿主细胞中。

载体不妨是不妨变化到宿主细胞中并在宿主细胞内复制的所有载体。比方包括编码葡糖基变化酶的核酸的载体不妨在动作成长和扩增载体的本领的细菌宿主细胞中变化并复制。载体也不妨被变化到表白宿主中使得编码核酸不妨被表白为功效性葡糖基变化酶。用作表白宿主的宿主细胞不妨包括比方丝状真菌。

不妨将编码葡糖基变化酶的核酸灵验地对接到符合的开用子其答应在宿主细胞中转录。开用子不妨是在采用的宿主细胞中表露转录活性的所有dna序列而且可此后源于编码与宿主细胞共源抑大概异源的蛋白质的基因。用于指引编码葡糖基变化酶的dna序列的转录(特别是在细菌宿主中)的示例性开用子是大肠杆菌的乳糖安排子的开用子、天蓝链霉菌(streptomycescoelicolor)琼脂酶基因daga大概cela开用子、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyl)的开用子、嗜热脂肪芽孢杆菌(bacillusstearothermophilus)生麦芽糖淀粉酶基因(amym)的开用子、解淀粉芽孢杆菌(bacillusamyloliquefaciens)α-淀粉酶基因(amyq)的开用子、枯草芽孢杆菌xyla和xylb基因的开用子等。闭于于在真菌宿主中的转录有用的开用子的实例是衍生自编码米曲霉(aspergillusoryzae)taka淀粉酶、米氏根瘤菌(rhizomucormiehei)天冬氨酸蛋白酶、黑曲霉(aspergillusniger)中性α-淀粉酶、黑曲霉酸宁静性α-淀粉酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、米氏根瘤菌脂肪酶、米曲霉碱性蛋白酶、米曲霉三糖磷酸异构酶大概构巢曲霉(a.nidulans)乙酰胺酶的基因的开用子。当编码葡糖基变化酶的基因在细菌物种(如大肠杆菌)中表白时不妨从比方包括t7开用子和噬菌体λ开用子的噬菌体开用子当采用符合的开用子。用于在酵母物种中表白的符合的开用子的实例包括然而不限于酿酒酵母(saccharomycescerevisiae)的gal1和gal10开用子以及毕赤酵母(pichiapastoris)aox1大概aox2开用子。cbh1是来自里氏木霉的内源开辟型开用子。参睹liu等人(2008)“improvedheterologousgeneexpressionintrichodermareeseibycellobiohydrolaseigene(cbh1)promoteroptimization[纤维二糖水解酶i基因(cbh1)开用子优化革新里氏木霉中的异源基因表白],”actabiochim.biophys.sin(shanghai)[生去世学与生物物理学报(上海)]40(2):158-65。

编码序列不妨灵验地对接到旗号序列。编码旗号序列的dna不妨是与待表白的葡糖基变化酶基因天然相闭大概来自不共属大概物种的dna序列。不妨将包括dna建立体大概载体的旗号序列和开用子序列引入真菌宿主细胞而且可此后源于沟通的根源。比方旗号序列是灵验地对接到cbh1开用子的cbh1旗号序列。

表白载体还不妨包括适合的转录中断子以及在真核生物中包括灵验地对接至编码变体葡糖基变化酶的dna序列的聚腺苷酸化序列。中断序列和聚腺苷酸化序列不妨符合地根源于与开用子沟通的根源。

所述载体不妨进一步包括使得所述载体不妨在宿主细胞中复制的dna序列。此类序列的实例为质粒puc19、pacyc177、pub110、pe194、pamb1、和pij702的复制开始。

载体还不妨包括可采用标记比方其产品弥补分别的宿主细胞中的缺点的基因比方来自枯草芽孢杆菌大概地衣芽孢杆菌的dal基因大概者赋予抗生素抗性(比方氨苄青霉素、卡那霉素、氯霉素大概四环素抗性)的基因。其他载体不妨包括曲霉属采用标记比方amds、argb、niad和xxsc引起潮霉素抗性的标记大概者采用不妨经过共变化(如本范围已知的)实行。参睹比方国际pct请求wo91/17243。

细胞内表白在某些方面大概是有利的比方当运用某些细菌大概真菌动作宿主细胞爆发洪量葡糖基变化酶用于登时的富集大概纯化时。葡糖基变化酶的细胞外渗透至培养基中还可用于制备包括分别的葡糖基变化酶的培养的细胞材料。

表白载体典范地包括克隆载体的组分比方像答应载体在采用的宿主生物体中自决复制的元件和用于采用手段一个大概多个表型可检测的标记。表白载体常常包括控制核苷酸序列比方开用子、安排子、核糖体共同位点、翻译开始旗号以及任选地制止子基因大概一个大概多个激活子基因。其他表白载体可包括编码氨基酸序列的序列所述氨基酸序列不妨将葡糖基变化酶靶向宿主细胞细胞器(如过氧化物酶体)大概靶向简直宿主细胞区室。如许的靶向序列包括然而不限于序列skl。闭于于在控制序列的指引下进行表白将葡糖基变化酶的核酸序列以闭于表白的符合办法与控制序列灵验地对接。

用于分别对接编码葡糖基变化酶的dna建立体、开用子、中断子和其他元件并将它们插入到含有复制所需信息的符合的载体中的步调是本范围本领人员熟知的(参睹比方sambrook等人,molecularcloning:alaboratorymanual[分子克隆:试验室手册],第2版,coldspringharbor[冷泉港试验室],1989,和第3版,2001)。

宿主细胞的变化和培养

包括dna建立体大概表白载体的分别的细胞有利地用作沉组爆发葡糖基变化酶的宿主细胞。经过将dna建立体(以一大概多个拷贝)安排到宿主染色体中不妨方便地用编码酶的dna建立体变化细胞。常常认为这种安排是有利的因为dna序列更大概在细胞中宁静保护。不妨依据常规办法比方经过共源大概异源沉组将dna建立体安排到宿主染色体中。可代替地不妨用如上所述的与不共典型的宿主细胞相闭的表白载体变化细胞。

符合的细菌宿主生物的实例是革兰氏阳性细菌物种如芽孢杆菌属(bacillaceae)包括枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)、地衣芽孢杆菌(bacilluslicheniformis)、渐渐芽孢杆菌(bacilluslentus)、短芽孢杆菌(bacillusbrevis)、嗜热脂肪地芽孢杆菌(geobacillusstearothermophilus)(本嗜热脂肪芽孢杆菌(bacillusstearothermophilus)、嗜碱芽孢杆菌(bacillusalkalophilus)、解淀粉芽孢杆菌(bacillusamyloliquefaciens)、凝固芽孢杆菌(bacilluscoagulans)、灿烂芽孢杆菌(bacilluslautus)、宏大芽孢杆菌(bacillusmegaterium)和苏云金芽孢杆菌(bacillusthuringiensis);链霉菌属(streptomyces)物种如鼠灰链霉菌(streptomycesmurinus);乳酸细菌物种包括乳球菌属物种(lactococcussp.)如乳酸乳球菌(lactococcuslactis);乳杆菌属物种(lactobacillussp.)包括罗伊氏乳杆菌(lactobacillusreuteri);明串珠菌属物种(leuconostocsp.);片球菌属物种(pediococcussp.);和链球菌属物种(streptococcussp.)。可代替地不妨采用属于肠杆菌科(enterobacteriaceae)(包括大肠杆菌)大概假单胞菌科(pseudomonadaceae)的革兰氏阴性细菌物种的菌株动作宿主生物。

符合的酵母宿主生物不妨选自生物本领相闭的酵母物种比方然而不限于酵母物种如毕赤酵母属物种(pichiasp.)、汉逊酵母属物种(hansenulasp.)大概克鲁维酵母属(kluyveromyces)、耶氏酵母属(yarrowinia)、裂殖酵母属(schizosaccharomyces)物种大概者酵母属(saccharomyces)物种包括酿酒酵母(saccharomycescerevisiae)大概者属于裂殖酵母属的物种比方粟酒裂殖酵母(s.pombe)。甲基养分型酵母物种菌种毕赤酵母不妨用作宿主生物。可代替地宿主生物不妨是汉逊酵母属物种。丝状真菌中符合的宿主生物包括曲霉属(aspergillus)的物种比方黑曲霉、米曲霉、塔宾曲霉(aspergillustubigensis)、泡盛曲霉(aspergillusawamori)大概构巢曲霉(aspergillusnidulans)。可代替地镰刀菌属(fusarium)物种(比方尖孢镰刀菌(fusariumoxysporum))大概根瘤菌属(rhizomucor)物种(如米氏根瘤菌(rhizomucormiehei))的菌种不妨用作宿主生物。其他符合的菌株包括嗜热菌属(thermomyces)和毛霉菌属(mucor)物种。其他木霉属物种不妨用作宿主。变化曲霉属宿主细胞的符合的步调包括比方ep238023中刻画的步调。真菌宿主细胞表白的葡糖基变化酶不妨被糖基化即将包括糖基局部。糖基化形式不妨与野生型葡糖基变化酶中存留的沟通大概不共。糖基化的典型和/大概程度大概变化酶和/大概生化个性。

从表白宿主缺失基因是有利的个中不妨经过变化的表白载体治愈基因缺点。已知办法可用于赢得具备一种大概多种失活基因的真菌宿主细胞。不妨经过实脚大概局部缺失经过插入失活大概经过使基因闭于其预期手段不起效率的所有其他办法使得所述基因被遏止表白功效性蛋白来完成基因灭活。已克隆的、来自木霉属物种大概其他丝状真菌宿主的基因不妨缺失比方cbh1、cbh2、egl1和egl2基因。基因缺失可经过本范围已知办法经过将待失活的所需基因的办法插入质粒中来完成。

将dna建立体大概载体引入宿主细胞中包括本领比方变化;电穿孔;核显微打针;转导;转染比方脂质转染介导的和deae-糊精介导的转染;与磷酸钙dna积淀所有孵育;用dna包被的微粒高速轰打;以及本生质体混共。通用变化本领是本范围已知的。参睹比方sambrook等人(2001)共上。异源蛋白质在木霉属中的表白刻画于比方美国博利号6,022,725。闭于于曲霉属菌种的变化还参照了cao等人(2000)science[科学]9:991-1001。不妨用载体体系建立遗传宁静的变化体由此编码葡糖基变化酶的核酸被宁静安排到宿主细胞染色体中。而后经过已知本领采用并纯化变化体。

表白

爆发葡糖基变化酶的办法不妨包括在有用处爆发所述酶的前提下如上所述培养宿主细胞并从细胞和/大概培养基中接收所述酶。

用于培养细胞的培养基不妨是符合于所计划的宿主细胞成长并赢得葡糖基变化酶表白的所有常规培养基。适合的培养基和培养基组分可从贸易供给商赢得大概不妨依据果然的配方(比方如在美国典范培养物收躲核心(americantypeculturecollection)的目录中所述)来制备。

从宿主细胞中渗透的酶不妨用于全培养液制剂中。在本创造的办法中不妨运用本范围已知的所有培养办法来实行沉组微生物的用过的全发酵液的制备从而引导葡糖基变化酶的表白。因此发酵不妨领会为包括在试验室大概产业发酵罐中在适合的培养基和答应葡糖基变化酶不妨被表白大概分别的前提下进行的摇瓶培养、小范畴大概大范畴发酵(包括连接发酵、分批发酵、补料分批发酵大概固态发酵)。术语“用过的全发酵液”在本文中定义为包括培养基、胞外蛋白质(比方酶)和细胞生物质的发酵材料的未分级实质物。该当领会术语“用过的全发酵液”还涵盖已经运用本范围熟知的办法裂解大概透化的细胞生物质。

从宿主细胞中渗透的酶可方便地经过熟知的步调从培养基中接收所述步调包括经过离心大概过滤从培养基平分别细胞并借帮于盐(比方硫酸铵)积淀培养基的蛋白质组分而后运用色谱法比方离子调换色谱法、亲和色谱法等。

不妨将在载体中编码葡糖基变化酶的多核苷酸灵验地对接到控制序列所述控制序列不妨经过宿主细胞供给编码序列的表白即所述载体是表白载体。不妨比方经过增添其他转录调控元件来掩饰控制序列以使由控制序列指引的转录程度闭于转录安排因子更有应答。控制序列更加不妨包括开用子。

宿主细胞不妨在答应表白葡糖基变化酶的适合前提下培养。所述酶的表白不妨是构成型的使得它们能被连接爆发大概开辟型的须要刺激来开用表白。在开辟型表白的情景下当须要时可经过比目标培养基中增添开辟物质比方地塞米松大概iptg大概槐糖来开用蛋白质消费。多肽也不妨在体外无细胞体系(比方tnttm(普洛麦格公司(promega))兔网织红细胞体系)中沉组消费。

富集和纯化葡糖基变化酶的办法

发酵、分别和浓缩本领是本范围熟知的而且可运用常规办法来制备含葡糖基变化酶多肽的溶液。

发酵后赢得发酵液经过常规分别本领去除微生物细胞和百般悬浮固体(包括结余的粗发酵材料)以便赢得葡糖基变化酶溶液。常常运用过滤、离心、微滤、转化真空饱式过滤、超滤、离心而后超滤、提取大概色谱法等。

憧憬浓缩含葡糖基变化酶多肽的溶液以优化接收。运用未浓缩的溶液须要减少孵育时间以收集富集大概纯化的酶积淀物。

运用常规浓缩本领浓缩含酶溶液直至赢得所需的酶程度。含酶溶液的浓缩不妨经过在本文中所计划的本领中的任一种来实行。富集和纯化的示例性办法包括然而不限于转化饱式真空过滤和/大概超滤。

gtf酶

经过向符合的蔗糖溶液中增添gtf酶而爆发的葡聚糖会合物不妨是可溶性的大概不溶性的。葡聚糖的融化度取决于许多因素包括α1,3键的百分比、α1,6键合的百分比和会合物长度(dpn)。参睹比方美国博利号8,871,474其经过引用以其全文并入本文(‘474博利)。

gtf的其他产品(副产品)不妨包括葡萄糖(个中葡萄糖从葡糖基-gtf酶中央体复合物水解)、百般可溶性矮聚糖(dp2-dp7)、以及明串珠菌二糖(个中葡糖基-gtf酶中央体复合物的葡萄糖对接到果糖)。明串珠菌二糖是由经过α-1,5键对接的葡萄糖和果糖产生的二糖。葡糖基变化酶的野生型办法常常(在n-终局至c-末规矩进取)含有旗号肽、可变构造域、催化构造域、和葡聚糖共同构造域。

比方在本创造的某些实行例中葡糖基变化酶不妨衍生自链球菌属(streptococcus)物种、明串珠菌属(leuconostoc)物种大概乳杆菌属(lactobacillus)物种。可衍生葡糖基变化酶的链球菌属物种的实例包括唾液链球菌(s.salivarius)、表兄链球菌(s.sobrinus)、牙链球菌(s.dentirousetti)、汗毛链球菌(s.downei)、变异链球菌(s.mutans)、口腔链球菌(s.oralis)、解没食子酸链球菌(s.gallolyticus)和血链球菌(s.sanguinis)。可衍生葡糖基变化酶的明串珠菌属物种的实例包括肠膜明串珠菌(l.mesenteroides)、阿米巴氏明串珠菌(l.amelibiosum)、阿根廷明串珠菌(l.argentinum)、肉明串珠菌(l.carnosum)、柠檬明串珠菌(l.citreum)、乳脂明串珠菌(l.cremoris)、葡聚糖明串珠菌(l.dextranicum)和果糖明串珠菌(l.fructosum)。可衍生葡糖基变化酶的乳杆菌属物种的实例包括嗜酸乳杆菌(l.acidophilus)、德氏乳杆菌(l.delbrueckii)、瑞士乳杆菌(l.helveticus)、唾液乳杆菌(l.salivarius)、搞酪乳杆菌(l.casei)、委曲乳杆菌(l.curvatus)、植物乳杆菌(l.plantarum)、清酒乳杆菌(l.sakei)、短乳杆菌(l.brevis)、布赫内氏乳杆菌(l.buchneri)、发酵乳杆菌(l.fermentum)和罗伊氏乳杆菌(l.reuteri)。

依据本创造的一个方面已经决定爆发不溶性葡聚糖的gtf酶是特别优选的。不溶性葡聚糖是不溶于水溶液的葡聚糖。如‘474博利中所述不溶性葡聚糖会合物常常具备相闭于于α1,6键而言较高百分比的α1,3键且dpn起码为100。依据本创造的一个方面以下gtf酶可用于产生不溶性葡聚糖会合物:gtfj、gtf300、gtf0874、6855、2379、7527、1724、0544、5926、4297、5618、2765、0427、2919、2678、和3929。

本创造的优选实行例

依据本创造的一个方面供给了一种运用葡糖基变化酶在乳成品中爆发葡萄糖会合物以供给减少的质量的办法。所述办法从产生的葡萄糖会合物供给高的、坚韧和光润的质量。如上所述在本创造的左右文中质量意指厚度和/大概口感。如上所述淀粉在酸奶产业中款待运用认为酸奶供给质量。本创造的方吩咐人惊奇地供给了淀粉和其他宁静剂的代替品用于减少酸奶的质量。

依据本创造的一个方面增添的蔗糖被变化为葡萄糖会合物和果糖。当葡萄糖会合物减少酸奶的质量时果糖使酸奶具备果糖甜味。果糖不只革新了酸奶的质量还巩固了酸奶的甘旨性和味道。

在某些法令统率地区比方酶等组分大概须要将最后产品标记为具备该组分动作因素。在本创造的一方面因为奶不妨加热(包括巴氏杀菌)使gtf失活所以不妨将gtf视为加工帮剂。令人惊奇地已经创造由本创造供给的减少的质量不会被加热(以至在高达95℃加热6分钟)损害。

在本创造的另一个方面中发姑且中性ph在奶中爆发的葡萄糖会合物大概具备抵抗稳大概不均匀的表面。在发酵过程功夫接种培养物后ph低沉而且创造发酵功夫存留的葡萄糖会合物具备更均匀、有光彩的表面。

如上所述常常将宁静剂增添到酸奶中以减少质量。除了因为因素的成本而减少费用外当将酸奶倒入较小的容器中以调配到消耗者时增添的宁静剂(比方淀粉)须要特其他处置步调。酸奶创造商常常必定将酸奶冷却至8℃之后再运出以调配到店铺。纵然不妨运用冷却板赶快分批冷却酸奶然而闭于于含有宁静剂的酸奶不可行。假如含有宁静剂的酸奶在弥补到供消耗者购买的独力容器前分批冷却至8℃那么由该宁静剂供给的质量将在弥补过程功夫被剪切力损害。以这种办法破坏的质量无法回复从而损害了开始增添宁静剂的理想道理。

含宁静剂的酸奶必定弥补到20℃至25℃的容器中。一朝含有宁静剂的酸奶被弥补到容器中它不妨被冷却至约8℃并输送。然而这种办法的冷却较缓而且在供给冷却设备方面引导输送延平静费用减少。

依据本创造的一个方面人们创造含有爆发的葡萄糖会合物的酸奶可在弥补前冷却至5℃。此特性可俭朴洪量成本。

在本创造的另一方面不妨将含有爆发的葡萄糖会合物的酸奶与宁静剂(比方淀粉大概果胶)拉拢以供给长保质期、高度宁静、质量减少的酸奶。宁静剂也可用于预防因在矮ph加热酸奶而引起的蛋白质积淀。

酸奶的蛋白质和脂肪含量不妨出于成本和/大概感知兴盛缘故的计划而变化。比方脂肪为酸奶供给质量和憧憬的味道。然而出于兴盛缘故消耗者大概更爱好矮脂酸奶大概以至脱脂酸奶。依据本创造爆发的葡萄糖会合物不妨经过缩小大概取消脂肪来弥补质量破坏。减少酸奶蛋白质含量也是减少质量的一种办法。然而减少酸奶蛋白质含量会爆发费用。依据本创造已经创造本创造的葡萄糖会合物不妨代替所增添的蛋白质供给质量大概供给所增添的蛋白质之外的质量。

依据本创造的一个方面提出了一种用于制备具备革新的质量的酸奶产品的办法革新的质量为减少的厚度和/大概口感所述办法具备以下办法:供给奶;向所述奶中增添蔗糖以产生增甜奶;使所述增甜奶与葡糖基变化酶交战以产生不溶性葡萄糖会合物;接种起子培养物;以及发酵以供给所述具备革新的质量的酸奶产品所述革新的质量为减少的厚度和/大概减少的口感。

优选地所述奶是牛奶。优选地所述奶选自在以下构成的组:生奶、预巴氏杀菌的奶、全脂奶、脱脂奶、复本奶、乳糖酶处置的奶、降乳糖奶、无乳糖奶和炼奶。在其他优选的实行例中所述奶是生奶。

优选地所述办法具备将所述奶均质化和巴氏杀菌的特殊的办法。在本创造的一个优选的方面所述与葡糖基变化酶交战的办法在均质化和巴氏杀菌办法之降后行。在又另一个优选的实行例中所述与葡糖基变化酶交战的办法在均质化和巴氏杀菌办法之进步辇儿。

优选地增添所述蔗糖以产生约0.1%至12%(w/w)。更优选地增添所述蔗糖以产生约2%至8%(w/w)。在仍更优选的实行例中增添所述蔗糖以产生约4%至6%(w/w)。

优选地所述葡糖基变化酶是与选自在以下构成的组的酶具备起码70%序列普遍性的酶:gtfj(seqidno:1)、gtf300(seqidno:2)、gtf0874(seqidno:3)、gtf6855(seqidno:4)、gtf2379(seqidno:5)、gtf7527(seqidno:6)、gtf1724(seqidno:7)、gtf0544(seqidno:8)、gtf5926(seqidno:9)、gtf4297(seqidno:10)、gtf5618(seqidno:11)、gtf2765(seqidno:12)、gtf2919(seqidno:13)、gtf2678(seqidno;14)、和gtf3929(seqidno:15)。更优选地所述葡糖基变化酶是与选自在以下构成的组的酶具备起码80%序列普遍性的酶:gtfj(seqidno:1)、gtf300(seqidno:2)、gtf0874(seqidno:3)、gtf6855(seqidno:4)、gtf2379(seqidno:5)、gtf7527(seqidno:6)、gtf1724(seqidno:7)、gtf0544(seqidno:8)、gtf5926(seqidno:9)、gtf4297(seqidno:10)、gtf5618(seqidno:11)、gtf2765(seqidno:12)、gtf2919(seqidno:13)、gtf2678(seqidno;14)、和gtf3929(seqidno:15)。仍更优选地所述葡糖基变化酶是与选自在以下构成的组的酶具备起码90%序列普遍性的酶:gtfj(seqidno:1)、gtf300(seqidno:2)、gtf0874(seqidno:3)、gtf6855(seqidno:4)、gtf2379(seqidno:5)、gtf7527(seqidno:6)、gtf1724(seqidno:7)、gtf0544(seqidno:8)、gtf5926(seqidno:9)、gtf4297(seqidno:10)、gtf5618(seqidno:11)、gtf2765(seqidno:12)、gtf2919(seqidno:13)、gtf2678(seqidno;14)、和gtf3929(seqidno:15)。在又更优选的实行例中所述葡糖基变化酶是与以下具备起码95%序列普遍性的酶:gtfj(seqidno:1)、gtf300(seqidno:2)、gtf0874(seqidno:3)、gtf6855(seqidno:4)、gtf2379(seqidno:5)、gtf7527(seqidno:6)、gtf1724(seqidno:7)、gtf0544(seqidno:8)、gtf5926(seqidno:9)、gtf4297(seqidno:10)、gtf5618(seqidno:11)、gtf2765(seqidno:12)、gtf2919(seqidno:13)、gtf2678(seqidno;14)、和gtf3929(seqidno:15)。在仍更优选的实行例中所述葡糖基变化酶选自在以下构成的组:gtfj(seqidno:1)、gtf300(seqidno:2)、gtf0874(seqidno:3)、gtf6855(seqidno:4)、gtf2379(seqidno:5)、gtf7527(seqidno:6)、gtf1724(seqidno:7)、gtf0544(seqidno:8)、gtf5926(seqidno:9)、gtf4297(seqidno:10)、gtf5618(seqidno:11)、gtf2765(seqidno:12)、gtf2919(seqidno:13)、gtf2678(seqidno;14)、和gtf3929(seqidno:15)。仍更优选地所述葡糖基变化酶是gtfj(seqidno:1)。

优选地所述葡糖基变化酶以约0.005mg/100ml奶至15mg/100ml奶的量存留于所述奶中。更优选地所述葡糖基变化酶以约0.03mg/100ml奶至约12.5mg/100ml奶的量存留。

优选地所述gtfj以约0.033mg/100ml奶至约12.5mg/100ml奶的量存留。更优选地所述gtfj以约0.3mg/100ml奶至约5.0mg/100ml奶的量存留。

在其他优选的实行例中所述葡糖基变化酶是gtf300(seqidno:2)。优选地所述gtf300以约0.033mg/100ml至约12.5mg/100ml奶的量存留。更优选地所述gtf300以约0.3mg/100ml奶至约5mg/100ml奶的量存留。

优选地所述减少的质量是减少的厚度。优选地与闭于仿造品(不加gtf酶)比拟所述厚度减少30%大概更多。更优选地所述厚度减少50%大概更多。仍更优选地所述厚度减少70%大概更多。在又更优选的实行例中所述厚度减少90%大概更多。更优选地所述厚度减少100%大概更多。仍更优选地所述厚度减少110%大概更多。在最优选的实行例中所述厚度减少120%大概更多。

在其他优选的实行例中所述减少的质量是减少的口感。优选地与闭于仿造品(不加gtf酶)比拟所述口感减少30%大概更多。更优选地所述口感减少50%大概更多。仍更优选地所述口感减少70%大概更多。在又更优选的实行例中所述口感减少90%大概更多。仍更优选地所述口感减少100%大概更多。在又更优选的实行例中所述口感减少110%大概更多。在最优选的实行例中所述口感减少120%大概更多。

依据本创造的一个方面所述奶是矮脂奶以供给矮脂酸奶。在本创造的一个更优选的方面中所述奶是脱脂奶以供给脱脂酸奶。

在本创造的另一个优选方面中将所述奶的蛋白质含量安排至起码约3%(w/w)。更优选地将所述奶的蛋白质含量安排至起码约3.5%。仍更优选地将所述奶的蛋白质含量安排至起码约3.7%(w/w)。在其他优选的实行例中将所述奶的蛋白质含量安排至起码约3.8%(w/w)。在仍更优选的实行例中将所述奶的蛋白质含量安排至起码约3.9%(w/w)。在其他还优选的实行例中将所述奶的蛋白质含量安排至起码约4.0%(w/w)。

在本创造的另一个方面所述办法包括以下的进一步办法:将所述酸奶冷却至5℃至10℃的温度以供给冷冻的酸奶;以及将所述冷冻的酸奶倒入预成型的容器中。优选地所述容器供给一人份的酸奶。本创造该方面的优选实行比方上所述。

在本创造的另一个方面中提出了一种依据上述办法中任一项制备的酸奶。优选地所述酸奶含有果胶。

在本创造的另一个方面中所述奶包括起码4%乳糖(w/w)。优选地所述奶包括起码4.5%乳糖。

在本创造的另一个方面中提出了一种制备具备革新的质量的减糖食物产品(reducedsugarfoodproduct)的办法所述办法包括以下办法:供给包括蔗糖和乳糖的食物基质;以及使所述食物基质与葡糖基变化酶交战以产生不溶性葡萄糖会合物。

优选地所述食物基质中的蔗糖为约0.1%至约12%(w/w)。更优选地所述蔗糖为约2%至约8%(w/w)。仍更优选地所述蔗糖为约4%至约6%(w/w)。

优选地所述食物基质中的乳糖为约0.1%至约12%(w/w)。更优选地所述乳糖为约2%至约8%(w/w)。仍更优选地所述乳糖为约4%至约6%(w/w)。

优选地所述食物基质中的革新的质量是减少的厚度和/大概减少的口感。

优选地所述食物基质是乳成品、饮料、面团大概面包、糖果、发酵饮料、调料、调味汁、大概加工肉。

优选的葡糖基变化酶如上所述。

本文的一些实行例波及如姑且果然的办法然而是个中起码一种果糖基变化酶代替如本文果然的葡糖基变化酶运用大概除本文果然的葡糖基变化酶之外还运用起码一种果糖基变化酶。本文中的“果糖基变化酶”(大概“果糖蔗糖酶”)是指不妨将果糖从蔗糖底物变化至糖类受体(比方蔗糖大概果聚糖)从而爆发葡萄糖和果糖基化的糖类产品(例假如聚糖如2,1-β-果聚糖[菊糖]大概2,6-β-果聚糖[左聚糖(levan)])的酶。基于运用果糖基变化酶本文的奶拉拢物的蔗糖被变化为果聚糖而不是葡聚糖而且爆发了游离葡萄糖而不是游离果糖。本文中的果糖基变化酶的实例分类在酶学委员会(e.c.)第2.4.1.9号(比方菊粉蔗糖酶(inulosucrase))大概2.4.1.99(比方左聚糖蔗糖酶(levansucrase))下的那些。其他的实例包括果糖基变化酶如美国博利号5952205、5641667和6872555中任一项果然的将所述博利经过引用并入本文。预期在乳成品大概其他食物产品中本位运用果糖基变化酶爆发果聚糖答应爆发具备起码革新的质量、膳食纤维、和/大概益生元本质的产品。可代替地不妨将果聚糖直接增添至乳成品大概其他食物产品中;比方这种果聚糖不妨是所有前述果糖基变化酶的产品。

本文的一些实行例波及如姑且果然的办法然而是个中起码一种葡聚糖蔗糖酶代替如本文果然的葡糖基变化酶运用大概除本文果然的葡糖基变化酶之外还运用起码一种葡聚糖蔗糖酶。本文的葡聚糖蔗糖酶是指不妨从蔗糖合成右旋糖酐(比方包括起码约50%、60%、70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、大概100%α-1,6糖苷键的水溶性α-葡聚糖)和果糖的葡糖基变化酶典型而且常常归类于ec2.4.1.5下。在一些方面葡聚糖蔗糖酶可爆发具备约、起码约、大概不大于约2500万、5000万、1亿、2亿、5亿大概8.5亿道尔顿的沉等分子量(mw)的右旋糖酐。在一些情景下葡聚糖蔗糖酶不妨爆发包括以下的右旋糖酐:(i)约87wt%-93wt%在地位1和6处对接的葡萄糖;(ii)约0.1wt%-1.2wt%在地位1和3处对接的葡萄糖;(iii)约0.1wt%-0.7wt%在地位1和4处对接的葡萄糖;(iv)约7.7wt%-8.6wt%在地位1、3和6处对接的葡萄糖;以及(v)约0.4wt%-1.7wt%在以下地位处对接的葡萄糖:(a)地位1、2和6大概(b)地位1、4和6;而且具备约5000万-2亿道尔顿的mw和约200-280nm的z-平稳回转半径。在一些情景下葡聚糖蔗糖酶可爆发具备约、起码约、大概不大于约10、25、50、75、100、105、110、150、200、250、300、400、500、600、大概700的会合度(dp)大概沉均dp(dpw)的右旋糖酐。在一些情景下右旋糖酐不妨包括1%-50%α-1,2分支(每个分支常常是单个葡萄糖单元)个中此类分支是在右旋糖酐合成功夫由葡聚糖蔗糖酶自己(其进一步具备α-1,2分支活性)增添的。具备某些前述本领的葡聚糖蔗糖酶的实例(比方gtf0768、gtf8117、gtf6831、gtf5604、dsr-e)如美国博利请求果然号2016/0122445、2017/0145120、2018/0282385、2017/0218093和2010/0284972中任一项果然的将所述博利理想经过引用并入本文。预期在乳成品大概其他食物产品中本位运用葡聚糖蔗糖酶爆发右旋糖酐答应爆发具备起码革新的膳食纤维和/大概益生元本质的产品。可代替地不妨将右旋糖酐直接增添至乳成品大概其他食物产品中;比方这种右旋糖酐不妨是所有前述葡聚糖蔗糖酶的产品。

本文的一些实行例波及如姑且果然的办法然而是个中起码一种消费变体(工程化的)α-1,3-葡聚糖的葡糖基变化酶代替如本文果然的葡糖基变化酶运用大概除本文果然的葡糖基变化酶之外还运用起码一种消费变体(工程化的)α-1,3-葡聚糖的葡糖基变化酶。这种变体葡糖基变化酶不妨爆发α-1,3葡聚糖(比方包括起码约50%、60%、70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、大概100%α-1,3糖苷键的水不溶性α-葡聚糖)而且在一些方面葡聚糖产品与由酶的非变体闭于应物(比方亲本酶)爆发的α-1,3-葡聚糖比拟具备更矮大概更高的分子量和/大概以更高的产率爆发。符合的亲本酶的实例在本文果然为gtf-j、gtf0874、gtf6855、gtf2379、gtf7527、gtf1724、gtf0544、gtf5926、gtf4297、gtf5618、gtf2765、gtf0427、gtf2919、gtf2678和gtf3929;值得注沉的是gtf300(seqidno:2)是gtf6855(seqidno:4)的变体。在一些方面爆发变体α-1,3-葡聚糖的葡糖基变化酶不妨爆发不溶性α-1,3-葡聚糖(其具备约大概小于约300、280、260、240、220、200、180、160、140、120、100、80、60、50、40、30、25、20、15、大概11的dp大概dpw)和/大概不妨如美国博利请求号16/295,423(如本始提接的)中果然的将所述博利经过引用并入本文。比方闭于爆发较矮分子量的α-1,3-葡聚糖(比方dp大概dpw<300)符合的代替位点和在这些位点的简直代替的实例不妨包括美国博利请求号16/295,423的表3大概4中列出的与不溶性α-1,3-葡聚糖产品的dpw降矮约大概起码约10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、大概85%相闭的那些中任一项。比方闭于爆发较高分子量的α-1,3-葡聚糖符合的代替位点和在这些位点的简直代替的实例不妨包括美国博利请求果然号2019/0078062(经过引用并入本文)的表3、4、大概5中列出的与不溶性α-1,3-葡聚糖产品的dpw减少约大概起码约10%、20%、30%、40%、50%、大概60%相闭的那些中任一项。比方闭于以更高的产率爆发α-1,3-葡聚糖符合的代替位点和在这些位点的简直代替的实例不妨包括美国博利请求果然号2019/0078063(经过引用并入本文)的表3、6、大概7中列出的与(i)明串珠菌二糖消费降矮起码约10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、大概95%和/大概(ii)葡聚糖产率减少起码约10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、110%、120%、130%、140%、大概150%相闭的那些中任一项。预期在乳成品大概其他食物产品中本位运用变体葡糖基变化酶爆发α-1,3-葡聚糖答应爆发具备起码革新的质量、膳食纤维、和/大概益生元本质的产品。可代替地不妨将如由本文的变体葡糖基变化酶爆发的(大概可从本文的变体葡糖基变化酶爆发的)α-1,3-葡聚糖直接增添至乳成品大概其他食物产品。

在一些方面处于右旋糖酐-α-1,3-葡聚糖嵌段共聚物办法的α-1,3-葡聚糖不妨直接增添至奶大概其他乳成品中。此类嵌段共聚物的实例果然于国际博利请求果然号wo2017/079595大概美国博利请求果然号2019/0185893中将所述博利请求经过引用并入本文。在一些方面右旋糖酐-α-1,3-葡聚糖嵌段共聚物的右旋糖酐组分(比方用以爆发嵌段共聚物的右旋糖酐)包括:(i)约87wt%-93wt%在地位1和6处对接的葡萄糖;(ii)约0.1wt%-1.2wt%在地位1和3处对接的葡萄糖;(iii)约0.1wt%-0.7wt%在地位1和4处对接的葡萄糖;(iv)约7.7wt%-8.6wt%在地位1、3和6处对接的葡萄糖;以及(v)约0.4wt%-1.7wt%在以下地位处对接的葡萄糖:(a)地位1、2和6大概(b)地位1、4和6;而且具备约5000万-2亿道尔顿的mw和约200-280nm的z-平稳回转半径。在一些方面不妨运用如美国博利请求果然号2016/0122445中果然的gtf0768爆发右旋糖酐-α-1,3-葡聚糖嵌段共聚物的右旋糖酐组分。在一些方面右旋糖酐-α-1,3-葡聚糖嵌段共聚物包括约大概起码约50wt%、55wt%、60wt%、65wt%、70wt%、75wt%、80wt%、85wt%、大概90wt%右旋糖酐。预期将右旋糖酐-α-1,3-葡聚糖嵌段共聚物直接增添至乳成品大概其他食物产品可认为产品供给起码革新的质量、膳食纤维、和/大概益生元本质。

本文的一些实行例波及缩小食物产品大概食物前体产品的热量含量、和/大概减少食物产品大概食物前体产品的膳食纤维含量的办法。该办法不妨包括在符合的前提下用第一磷酸化酶和第二磷酸化酶处置含糖类的食物产品大概食物前体产品个中所述糖类(存留于食物产品大概食物前体产品中)是哺乳动物(比方人)可消食(即热量)的糖类并包括葡萄糖而且所述第一磷酸化酶将哺乳动物可消食的糖类变化为包括α-葡萄糖-1-磷酸盐(α-g1p)的产品而且所述第二磷酸化酶使所述α-g1p与糖类受体反应以爆发哺乳动物不用食(即非热量)的糖类。该办法缩小了食物产品大概食物前体产品的热量含量和/大概减少了食物产品大概食物前体产品的膳食纤维含量。该办法的特性不妨包括比方如美国博利请求果然号2017/0327857大概美国博利请求号16/383,820(如本始提接的)中果然的任一项将所述博利请求经过引用并入本文。本文的“磷酸化酶”是指依据cazy(碳水化合物活性酶)数据库属于糖基水解酶94(gh94)家眷的特定典型的酶(cazy.org网站;参睹cantarel等人,2009,nucleicacidsres.[核酸探究]37:d233-238经过引用并入本文)。常常这种磷酸化酶催化以下反应:第一磷酸化酶用作底物以爆发α-g1p的哺乳动物可消食的糖类常常包括具备一个大概多个葡萄糖残基的二糖、鳏糖大概多糖;如许的一个大概多个葡萄糖残基被第一磷酸化酶用来制备α-g1p。本文的第一磷酸化酶的实例包括淀粉磷酸化酶(ec2.4.1.1)和蔗糖磷酸化酶(ec2.4.1.7)其分别运用淀粉和蔗糖以爆发α-g1p。本文中的第二磷酸化酶运用α-g1p(由第一磷酸化酶爆发)和糖类受体来爆发哺乳动物(比方人)不行消食的鳏糖大概多糖。这种不用食的糖类的实例是β-葡聚糖(比方包括起码约90%、95%大概100%的β-糖苷键的鳏糖大概多糖)。在一些方面本文的糖类受体包括β-1,4糖苷键和/大概第二磷酸化酶是爆发β-1,4-葡聚糖(比方包括起码约90%、95%大概100%的β-1,4糖苷键)的纤维糊精磷酸化酶。在一些方面糖类受体包括β-1,3糖苷键且第二磷酸化酶是爆发β-1,3-葡聚糖(比方包括起码约90%、95%大概100%的β-1,3糖苷键)的β-1,3-葡聚糖磷酸化酶。在一些方面用第一磷酸化酶和第二磷酸化酶共时处置食物产品大概食物前体产品大概以渐渐(step-wise)办法从第一磷酸化酶发端处置食物产品大概食物前体产品。

依据本创造的另一方面创造用葡糖基变化酶处置含有含蔗糖乳成品的产品将蔗糖变化为聚葡萄糖和果糖。这引导最后乳成品中总糖分子(蔗糖、果糖、葡萄糖等)的沉量浓度降矮。爆发的聚葡萄糖不妨是对接葡萄糖环中碳1至6的α大概β葡萄糖键。简直地道闭于于α(1-3)葡聚糖而言会合度高于5时它变得不溶且不妨用作膳食纤维而有益兴盛。

在本创造的另一个方面中提出了一种缩小食物产品大概食物前体产品的热量含量、和/大概减少食物产品大概食物前体产品的膳食纤维含量的办法所述办法包括以下办法:在符合的前提下用葡糖基变化酶处置含有蔗糖的食物产品大概食物前体产品以将所述食物产品大概食物前体产品的蔗糖变化为α-葡聚糖从而缩小所述食物产品大概食物前体产品的热量含量和/大概减少所述食物产品大概食物前体产品的膳食纤维含量。

优选地在所述处置办法之后的食物产品大概食物前体产品中蔗糖的沉量浓度为在所述处置办法之前存留的食物产品大概食物前体产品中蔗糖的沉量浓度的0%-80%。更优选地在所述处置办法之后的食物产品大概食物前体产品中蔗糖的沉量浓度为在所述处置办法之前存留的食物产品大概食物前体产品中蔗糖的沉量浓度的0%-30%。

优选地所述α-葡聚糖具备5-5000的dpw。

优选地所述α-葡聚糖是α-1,3-葡聚糖。

更优选地所述α-1,3-葡聚糖具备起码50%的α-1,3键和5-1600的dpw。

优选地所述食物产品大概食物前体产品包括乳因素。

用于本创造该方面的优选的糖基变化酶如上所述。

本果然在以下实例中进一步留神刻画所述实例不虞欲以所有办法节制本果然所乞求保护的范畴。附图意在被计划为本果然证明书籍和刻画的组因素。供给下列实例以证明然而不节制所乞求保

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