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一种可控制体重的益生菌片剂及其制备方法与流程 (哪种益生菌调理肠胃好)

来源: 浏览: 14次  更新时间:2021-12-12 20:25

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益生菌有片剂吗

一种可控制体沉的益生菌片剂及其制备办法与过程
本创造波及食物范围更加波及一种可控制体沉的益生菌片剂及其制备办法。
背景本领
:肥肥动作一种寰球性的大众卫生问题据2016年的世界卫生构造统计数据表露官方网站据2016年的世界卫生构造统计数据表露在寰球有胜过19亿成年人面对肥肥问题。肥肥重要展现为体内脂肪格外 格外大概适量会合以致激励一系列相闭并发症并威胁人们的身材兴盛。肥肥重要受遗传、生存与饮食风俗、情况与社会闭系、情绪与情绪认知、心理和代谢等多因素效率与许多缓性代谢疾病有相闭性比方高血压、血脂代谢凌乱、胰岛素保卫、ⅱ型糖尿病、冠芥蒂等。肥肥动作一种缓性代谢性疾病从多方面效率着人们的兴盛还不妨引导多种其他代谢性疾病的展开。姑且因为人们生存、饮食风俗的变革在当代肥肥病号越来越多。肥肥病号的肠道微生物群和平常人比拟展现为菌群百般性和丰采降矮菌群在门程度的变化与肥肥接近相闭个中变形菌门、厚壁菌门和放线菌门的相闭于丰采明显减少而拟杆菌门相闭于丰采明显降矮。这些菌群的变化引导丁酸盐爆发缩小从而降矮肠道障碍完备性、减少黏液降解及氧化应激。探究创造益生菌不妨经过制止脂类的合成、接收促进胆固醇消除等道路降矮血脂从而减沉。相较于常规减肥药而言益生菌制剂副效率小不会效率机体免疫力和平常代谢本能因此从食疗的角度从食物用微生物发端配搭具备款待大众承认度的降脂减肥食物本料开拓一款宁靖、稳当、灵验的可控制体沉的益生菌复合片剂具备杰出的商场价格。本领实行因素:为了处理上述本领问题本创造供给了一种可控制体沉的益生菌片剂及其制备办法。在该益生菌片剂中植物乳杆菌1701与发酵乳杆菌whh3906之间具备协共效率复配后能表现较好的降脂减肥效验;蓝莓粉和生姜粉能缓和缓性炎症缩小肠道中的致病菌有用处植物乳杆菌和发酵乳杆菌的成长和定植;菊粉和赤藓糖醇不妨动作植物乳杆菌和发酵乳杆菌的能源物质促进其成长有用处乳杆菌表现控制体沉的功效。本创造的简直本领筹备为:一种可控制体沉的益生菌片剂包括发酵乳杆菌冻搞粉、植物乳杆菌冻搞粉、白芸豆提取物、绿咖啡豆提取物、蓝莓粉、生姜粉、菊粉、赤藓糖醇、直压型辅料、维生素c和硬脂酸镁;所述发酵乳杆菌冻搞粉由发酵乳杆菌和/大概其渐变机制得;所述发酵乳杆菌定名为whh3906已在2020年3月13日在华夏微生物菌种收躲控制委员会普遍微生物核心收躲收躲单元地方为北京市往阳区北辰西路1号院3号微生物收躲编号为cgmccno.19472微生物分类定名为发酵乳杆菌lactobacillusfermentum;所述渐变体为闭于所述发酵乳杆菌进行诱变、驯化、基因沉组大概者经天然渐变而赢得的渐变体;所述植物乳杆菌冻搞粉由植物乳杆菌和/大概其渐变机制得;所述植物乳杆菌定名为1701已在2019年10月23日在华夏微生物菌种收躲控制委员会普遍微生物核心收躲收躲单元地方为北京市往阳区北辰西路1号院3号其收躲编号为cgmccno.18728微生物分类定名为植物乳杆菌lactobacillusplantarum;所述渐变体为闭于所述植物乳杆菌进行诱变、驯化、基因沉组大概者经天然渐变而赢得的渐变体。本创造配方中以特定的发酵乳杆菌whh3906和植物乳杆菌1701为重邀功效物白芸豆提取物、绿咖啡豆提取物、蓝莓粉、生姜粉、菊粉、赤藓糖醇、直压型辅料、维生素c和硬脂酸镁为辅料。个中发酵乳杆菌whh3906是一种从华夏西躲地区采集的顽固发酵食物中所分别赢得的益生菌菌株经过动物试验考订其具备杰出的耐受性和黏附性不妨明显降矮体沉、缩小体内脂肪积聚、降矮脏器比和体脂比并能降矮瘦素程度降矮血脂革新肥肥相闭缓性炎症缓和非酒精性脂肪肝可用于预防和调节肥肥。其他在动物试验过程中未发本质验动物牺牲、精力不振、食欲不振等不良状况证明该菌种具备较高的宁靖性。简直而言上述发酵乳杆菌whh3906具备以下便宜:(1)具备杰出的耐酸耐胆盐本领和黏附性不妨成功经过胃肠道并定殖于肠道中表现益生功效:在ht-29细胞模型考查中展现出杰出的黏附本领单细胞黏附菌数达7.01±0.86分别是闭于照贸易菌株lcs和lgg的4.64倍和1.34倍;在ph2.5情况下孵育4h成活率为97.48%在0.3%胆盐浓度下孵育8h成活率为79.85%优于闭于照贸易菌株lcs和lgg;(2)不妨灵验降矮体沉缩小脂肪积聚:服用剂量在1×109cfu/d具备明显效验体沉降矮程度达8.18%体沉减少量降矮22.03%脂肪沉量降矮19.13%体脂比降矮13.25%;(3)不妨明显降矮血清总胆固醇和甘油三酯程度;(4)不妨明显降矮血清癯素程度使肥肥个别回复闭于瘦素的敏锐性因而能灵验促进脂解和脂肪细胞凋亡制止脂肪合成缩小体内脂肪积聚缩小体沉。而姑且尚未创造具备降矮血清癯素功效的发酵乳杆菌。上述发酵乳杆菌whh3906能缓和非酒精性脂肪肝简直表姑且以下方面:(1)不妨明显降矮肝脏沉量和脏器比:服用剂量在1×109cfu/d具备明显效验肝脏沉量降矮16.88%脏器比降矮6.25%;(2)不妨明显缩小肝脏构造细胞的脂肪变性缩小脂肪空泡且空泡更小;(3)具备较强的抗氧化本领具备较高的驱除dpph本领和驱除羟自在基本领:驱除dpph和羟自在基的本领分别是闭于照贸易菌株的2.10倍和1.69倍不妨缓和肝脏因为氧化应激引起的伤害;(4)不妨明显降矮肝脏中总胆固醇和甘油三酯的程度:服用活菌株剂量在1×109cfu/d具备明显效验肝脏中总胆固醇降矮15.15%甘油三酯降矮7.07%。上述发酵乳杆菌whh3906能缓和缓性炎症简直表姑且以下方面:(1)不妨灵验促进脾淋巴细胞增殖;(2)不妨灵验促进脾淋巴细胞渗透抑炎因子(即具备制止炎症效率的细胞因子)il-10且不妨促进il-12的渗透;(3)不妨灵验促进巨噬细胞渗透抑炎因子il-10制止其渗透促炎因子(即具备促进炎症效率的细胞因子)il-6、tnf-α和no;(4)不妨明显降矮血清中lps的程度:服用剂量在1×109cfu/d具备明显效验长久肥肥的大鼠血清中lps的程度降矮21.27%;(5)不妨明显降矮血清中促炎因子il-1β、il-6、tnf-α、mcp-1和no的程度;(6)不妨明显降矮肝脏中促炎因子l-1β、il-6、tnf-α、mcp-1和no的程度。植物乳杆菌1701(已在果然号为cn111254089a的华夏博利文件中果然)是一种从华夏西躲地区采集的顽固发酵食物中所分别赢得的益生菌菌株经过动物试验考订其具备杰出的耐受性和黏附性不妨明显降矮体沉、缩小体内脂肪积聚、降矮脏器比和体脂比并能缩小瘦素程度降矮血脂可用于预防和调节肥肥而且在其灭活后也具备减肥功效。其他在动物试验过程中未发本质验动物牺牲、精力不振、食欲不振等不良状况证明该菌种具备较高的宁靖性。本创造将发酵乳杆菌whh3906和植物乳杆菌1701复配后二者在减肥上展现出协共增效的效率:在大鼠试验中创造相较于径自服用而言将二种菌复配后高脂饮食的大鼠体沉以及肝脏和脂肪沉量减少明显减速粪便中消除的甘油三酯和总胆固醇量明显减少。本创造中的各辅料具备以下效率:(1)白芸豆提取物富含α-淀粉酶制止剂其经过非比赛性制止消食道内的唾液及胰α-淀粉酶与淀粉奇异性共同的糖苷位点从而制止α-淀粉酶活性阻断食物中局部淀粉领会缩小葡萄糖接收起到降矮餐后血糖的升高降矮脂肪合成等效率不妨灵验协共减肥者和糖尿病人的饮食调节。而且淀粉酶制止剂经过闭于淀粉酶的压创造用而表现减肥效力并经胃肠道消除体外因此不必加入血液轮回体系不效率于大脑核心减肥的共时不制止食欲运用剂量很高时也无副效率符合世界卫生构造的减肥规则。(2)绿咖啡豆提取物中富含绿本酸绿本酸不妨奇异性制止葡萄糖-6-磷酸下调葡萄糖-6-磷酸mrna的表白缩小肝糖的输出;绿本酸还不妨制止小肠闭于葡萄糖的接收1mm的绿本酸可使葡萄糖输送本领降矮80%。(3)蓝莓粉富含丰厚的多酚物质不妨革新高脂饮食开辟的肥肥和代谢综合症比方高血糖和胰岛素保卫安排肠道微生物菌群构造保护肠道菌群平稳。蓝莓中还富含花青素花青素不妨经过激活ampk来革新高血糖和胰岛素敏锐性ampk的激活伴跟着脂肪构造和骨骼肌中葡萄糖转运蛋白4的上调以及制止葡萄糖爆发和肝脏中脂质的减少缓和脂肪肝。而且花青素不妨明显制止由脂多糖开辟的促炎性介质比方一氧化氮、肿瘤坏死因子等经过效率nf-κb通路来表现其抗炎效率革新因为长久肥肥激励的缓性炎症。(4)生姜粉富含植去世学物质如姜辣素、姜烯酚类和姜油酮具备抗氧化活性、抗炎、抗癌、降胆固醇、降矮体沉和革新肥肥相闭代谢综合征等效率。(5)菊粉动作一种天然可溶性膳食纤维不只具备特殊的凝胶个性和好像脂肪的口感还具备降脂减肥、降糖、安排肠道益生菌、巩固胃肠功效、促进维生素及矿物质接收等多种心理功效。共时不妨被肠道内微生物代谢运用爆发短链脂肪酸并能促进胰岛素渗透普及机体能量消耗制止脂肪积聚。(6)赤藓糖醇是天然零热量的甜味剂甜味特性与蔗糖格外亲近而且不行被人体消食不会引起人体血糖和胰岛素变革。而且赤藓糖醇吸湿性极矮是格外理念的用于保护拉拢物矮水分、矮水分活度的食物本料有用处货架期益生菌的活性宁静。(7)维生素c天然存留于怪僻蔬菜、水果中是保护生物平常成长发育必定的一类微量养分物质有寒冷愉悦的酸味是格外杰出的食物酸味根源在革新口味的共时不妨补充人体所需的养分。(8)硬脂酸镁是新颖食物产业中特别是片剂消费中最常用的辅料之一不妨变化物料颗粒间的结合力具备帮留效率及光滑效率。白芸豆提取物和绿咖啡豆提取物主假如缩小机体闭于葡萄糖的接收从而降矮脂肪的产生。长久肥肥易激励机体缓性炎症蓝莓粉和生姜粉富含多种不妨缓和机体缓性炎症的物质不妨灵验革新机体缓性炎征候态。菊粉和赤藓糖醇动作膳食纤维一方面可动作乳酸菌的能源物质有用处其成长;另一方面不妨安排肠道菌群构造闭于机体兴盛有利。植物乳杆菌和发酵乳杆菌主假如经过降矮体内脂肪含量控制体沉其不妨促进机体闭于脂肪的消耗。由此瞅来植物乳杆菌和发酵乳杆菌与上述辅料协共运用后具备以下效率:(1)白芸豆提取物和绿咖啡豆提取物缩小体内脂肪的天生植物乳杆菌和发酵乳杆菌不妨减少体内脂肪消耗蓝莓粉和生姜粉不妨革新长久肥肥激励的缓性炎症几种物质协共能使本创造控制体沉的效率更加周到而且缓性炎症的缓和能缩小肠道中的致病菌有用处植物乳杆菌和发酵乳杆菌的成长和定植;(2)菊粉和赤藓糖醇不妨动作植物乳杆菌和发酵乳杆菌的能源物质促进其成长更好地表现益生功效。动作优选按沉量份包括发酵乳杆菌冻搞粉1-10份、植物乳杆菌冻搞粉1-10份、白芸豆提取物1-10份、绿咖啡豆提取物1-10份、蓝莓粉1-10份、生姜粉1-10份、菊粉20-40份、赤藓糖醇20-40份、直压型辅料10-30份、维生素c0.05-0.3份和硬脂酸镁0.2-1份。动作优选所述直压型辅料包括直压型麦芽糖醇、直压型山梨糖醇、直压型乳糖、直压型淀粉糖、直压型微晶纤维素中的一种大概多种。动作优选所述发酵乳杆菌冻搞粉中的活菌数为1×107cfu/g-1×1012cfu/g植物乳杆菌冻搞粉中的活菌数为1×107cfu/g-1×1012cfu/g。动作优选所述植物乳杆菌冻搞粉的制备办法包括以下办法:1)培养基的制备;2)菌株保护剂的制备;3)以5%-10%接种量将植物乳杆菌和/大概其渐变体接种于发酵基质中进行发酵培养;4)发酵中断后取发酵产品离心;5)将离心赢得的积聚物与菌株保护剂混共;6)冻搞;7)冻搞产品破坏、过筛赢得植物乳杆菌冻搞粉;所述发酵乳杆菌冻搞菌粉的制备办法包括以下办法:将办法3)中的植物乳杆菌和/大概其渐变体换成发酵乳杆菌和/大概其渐变体反复办法1)-7)赢得发酵乳杆菌冻搞粉。本创造采用生物工程恒ph高密度发酵本领、冷冻搞燥本领、破坏过筛工艺制备发酵乳杆菌冻搞粉和植物乳杆菌冻搞粉赢得的冻搞粉具备活菌数高且水分含量矮、水分活度矮能保护个中的发酵乳杆菌、植物乳杆菌的活性宁静其他还具备粒径分别合理、与其他物料的混个本能杰出等特性。动作优选办法1)中所述培养基为矫正mrs培养基;所述培养基包括以下因素:葡萄糖20-30g、牛肉膏10-13g、胰蛋白胨5-7g、大豆蛋白胨5-7g、酵母粉5-6g、醋酸钠3-5g、柠檬酸氢二铵1-2g、磷酸氢二钾2-3g、硫酸镁0.4-0.6g、半胱氨酸盐酸盐0.4-0.7g、吐温-801-2ml、一水合硫酸锰0.2-0.25g、水1000ml;所述培养基的ph为6.5±0.2。动作优选办法2)中所述菌株保护剂包括以下因素:脱脂乳60-100g/l海藻糖80-120g/l甘油15-25g/l。动作优选办法3)中发酵温度为34-38℃发酵时间为13-18h发酵ph为4.5-6.0。本创造采用的是高密度发酵工艺须要闭于发酵ph进行调控。发酵乳杆菌whh3906在不控制发酵过程ph时发酵液活菌数达到4.2×109cfu/ml;而在发酵过程ph控制于ph5.5时发酵液活菌数达到7.7×109cfu/ml达到不控制ph时的1.83倍。植物乳杆菌1701在不控制发酵过程ph时发酵液活菌数达到1.1×109cfu/ml;而在发酵过程ph控制于ph5.5时发酵液活菌数达到3.5×109cfu/ml达到不控制ph时的3.18倍。动作优选办法4)中离心转速4000-10000rpm离心时间3-10min。动作优选办法5)中所述离心赢得的积聚物与菌株保护剂以1:1.5-3的沉量比混共。动作优选办法7)中过筛时筛网采用15-80手段准筛。一种所述益生菌片剂的制备办法包括以下办法:(1)称取各本料备用;(2)将除硬脂酸镁外的各含量沉量比小于1%的本料混共均匀赢得混共小料;(3)将除硬脂酸镁外的结余本料与办法(2)所得混共小料混共均匀赢得初混共物;(4)将办法(3)所得初混共物与硬脂酸镁混共均匀赢得总混共半成品;(5)将办法(4)所得总混共半成品用压片机压片即成绩生菌片剂。动作优选办法(2)中各含量沉量比小于1%的本料的沉量之和小于总配方用料量的2%时介入直压型辅料使沉量之和达到总配方用料量的2%再进行混共。动作优选办法(3)中混共转速为15-35rpm混共时间为10-20min。进一局面办法(3)中混共转速为30rpm混共时间为15min。动作优选办法(4)中混共转速为10-25rpm混共时间为5-20min。进一局面办法(4)中混共转速为15rpm混共时间为10min。动作优选办法(5)中压片过程中压片压力为7kn-18kn之间。动作优选办法(1)-(5)理想在gmp车间中恒温恒湿情况中进行温度为18-26℃湿度为25-40%。动作优选办法(6)所成绩生菌片剂的水分含量为2-5%(品质)水分活度为0.1-0.4aw。与现有本领比拟本创造具备以下便宜:(1)本创造中采用的发酵乳杆菌whh3906具备杰出的耐酸耐胆盐本领和黏附性不妨明显降矮体沉、缩小体内脂肪积聚、降矮脏器比和体脂比并能降矮瘦素程度降矮血脂革新肥肥相闭缓性炎症缓和非酒精性脂肪肝可用于预防和调节肥肥;(2)本创造将发酵乳杆菌whh3906和植物乳杆菌1701复配后二者在减肥上展现出协共增效的效率能更灵验地促进甘油三酯和胆固醇消除更好地控制体沉以及肝脏和脂肪沉量;(3)白芸豆提取物和绿咖啡豆提取物不妨缩小体内脂肪的天生植物乳杆菌和发酵乳杆菌不妨减少体内脂肪消耗蓝莓粉和生姜粉不妨革新长久肥肥激励的缓性炎症故相较于各因素径自运用而言本创造控制体沉的效率更加周到;而且缓性炎症的缓和能缩小肠道中的致病菌有用处植物乳杆菌和发酵乳杆菌的成长和定植;(4)菊粉和赤藓糖醇不妨动作植物乳杆菌和发酵乳杆菌的能源物质促进其成长有用处乳杆菌表现控制体沉的功效。附图证明图1为本创造菌株发酵乳杆菌whh3906的菌降特性(左图)和革兰氏染色显微镜参瞅特性(右图)。图2为本创造菌株发酵乳杆菌whh3906的成长曲线。图3为本创造菌株发酵乳杆菌whh3906的黏附试验镜检截止图。个中左图为闭于照贸易菌株lcs的黏附试验镜检截止图中央图为闭于照贸易菌株lgg的黏附试验镜检截止图右图为本创造菌株发酵乳杆菌whh3906的黏附试验镜检截止图。图4为大鼠摄食量和摄入总能量的变革。a图为摄食量b图为摄入总能量。*:展现与模型组比拟分别明显p<0.05;**:展现与模型组比拟分别极明显p<0.01。图5为大鼠体沉和总增沉的变革。a图为体沉b图为总增沉。*:展现与模型组比拟分别明显p<0.05;**:展现与模型组比拟分别极明显p<0.01。图6为大鼠脂肪沉和体脂比的变革。a图为脂肪沉b图为体脂比。*:展现与模型组比拟分别明显p<0.05;**:展现与模型组比拟分别极明显p<0.01。图7为大鼠血清总胆固醇和甘油三酯的变革。a图为总胆固醇b图为甘油三酯。*:展现与模型组比拟分别明显p<0.05;**:展现与模型组比拟分别极明显p<0.01。图8为大鼠血清癯素的变革。*:展现与模型组比拟分别明显p<0.05;**:展现与模型组比拟分别极明显p<0.01。图9为各组别大鼠的肝脏构造he染色切片图。切片夸大倍数为200倍个中左图为闭于照组中央为模型组右边为试验组。简直实行办法底下共同实行例闭于本创勉强进一步的刻画。总实行例一种可控制体沉的益生菌片剂包括发酵乳杆菌冻搞粉1-10份、植物乳杆菌冻搞粉1-10份、白芸豆提取物1-10份、绿咖啡豆提取物1-10份、蓝莓粉1-10份、生姜粉1-10份、菊粉20-40份、赤藓糖醇20-40份、直压型辅料10-30份、维生素c0.05-0.3份和硬脂酸镁0.2-1份。所述发酵乳杆菌冻搞粉、植物乳杆菌冻搞粉中的活菌数为1×107cfu/g-1×1012cfu/g。所述直压型辅料包括直压型麦芽糖醇、直压型山梨糖醇、直压型乳糖、直压型淀粉糖、直压型微晶纤维素中的一种大概多种。所述发酵乳杆菌冻搞粉由发酵乳杆菌和/大概其渐变机制得;所述发酵乳杆菌定名为whh3906已在2020年3月13日在华夏微生物菌种收躲控制委员会普遍微生物核心收躲微生物收躲编号为cgmccno.19472微生物分类定名为发酵乳杆菌lactobacillusfermentum;所述渐变体为闭于所述发酵乳杆菌进行诱变、驯化、基因沉组大概者经天然渐变而赢得的渐变体;所述植物乳杆菌冻搞粉由植物乳杆菌和/大概其渐变机制得;所述植物乳杆菌定名为1701已在2019年10月23日在华夏微生物菌种收躲控制委员会普遍微生物核心收躲其收躲编号为cgmccno.18728微生物分类定名为植物乳杆菌lactobacillusplantarum;所述渐变体为闭于所述植物乳杆菌进行诱变、驯化、基因沉组大概者经天然渐变而赢得的渐变体。所述植物乳杆菌冻搞粉的制备办法包括以下办法:1)培养基的制备:所述培养基为矫正mrs培养基其配方为葡萄糖20-30g、牛肉膏10-13g、胰蛋白胨5-7g、大豆蛋白胨5-7g、酵母粉5-6g、醋酸钠3-5g、柠檬酸氢二铵1-2g、磷酸氢二钾2-3g、硫酸镁0.4-0.6g、半胱氨酸盐酸盐0.4-0.7g、吐温-801-2ml、一水合硫酸锰0.2-0.25g、水1000ml;安排其ph为6.5±0.2;2)菌株保护剂的制备:所述菌株保护剂的配方为脱脂乳80g/l、海藻糖100g/l、甘油20g/l;3)以5%-10%接种量将植物乳杆菌和/大概其渐变体接种于发酵基质中进行发酵培养发酵温度为34-38℃发酵时间为13-18h发酵过程ph控制于ph4.5-6.0;4)发酵中断后取发酵产品离心去除上清液;离心转速4,000-10,000rpm离心时间3-10min;5)将离心赢得的积聚物与菌株保护剂以1:1.5-3的沉量比混共;6)冻搞;7)冻搞产品破坏、过筛筛网采用15-80手段准筛赢得植物乳杆菌冻搞粉;所述发酵乳杆菌冻搞菌粉的制备办法包括以下办法:将办法3)中的植物乳杆菌和/大概其渐变体换成发酵乳杆菌和/大概其渐变体反复办法1)-7)赢得发酵乳杆菌冻搞粉。一种上述益生菌片剂的制备办法包括以下办法:(1)依照沉量份配比称取各本料备用;(2)将除硬脂酸镁外的各含量沉量比小于1%的本料混共均匀赢得混共小料;当各含量沉量比小于1%的本料的沉量之和小于总配方用料量的2%时介入直压型辅料使其达到总配方用料量的2%再进行小料混共;(3)将除硬脂酸镁外的各辅料与混共小料所有混共均匀即得初混共物;混共转速控制在15-35rpm优选30rpm混共时间控制在10-20min优选15min;(4)将办法(3)所得初混共物与硬脂酸镁混共均匀赢得总混共半成品;混共转速控制在10-25rpm优选15rpm混共时间控制在5-20min优选10min;(5)将办法(4)所得总混共半成品用压片机压片即得片剂;压片过程中压片压力控制在7kn-18kn之间;(6)将办法(5)所得片剂用包装瓶包装即得成品;包装所用包装瓶采用内置搞燥剂的高密度聚乙烯(hdpe)包装瓶。个中办法(1)-(6)中安排过程理想在gmp车间中恒温恒湿情况中进行温度控制在18-26℃湿度控制在25-40%。所得成品水分、水分活度须要控制水分控制在2-5%(品质)水分活度控制在0.1-0.4aw。实行例1:高密度发酵工艺的优化本创造菌株发酵乳杆菌whh3906和植物乳杆菌1701经二代活化后按2%接种量接种于含有5lmrs培养基的发酵罐中培养前提:37℃150rpmph5.5大概者不控ph连接培养16h。取16h菌液用稀释涂布计数法测定活菌数。培养基的制备:所述mrs培养基其配方为葡萄糖20g、牛肉膏13g、胰蛋白胨5g、大豆蛋白胨7g、酵母粉6g、醋酸钠3g、柠檬酸氢二铵1g、磷酸氢二钾3g、硫酸镁0.6g、半胱氨酸盐酸盐0.4g、吐温-801ml、一水合硫酸锰0.2g水1000ml;安排其ph为6.5。由表1可知发酵乳杆菌whh3906在不控制发酵过程ph时发酵液活菌数达到4.2×109cfu/ml;而在发酵过程ph控制于ph5.5时发酵液活菌数达到7.7×109cfu/ml达到不控制ph时的1.83倍。植物乳杆菌1701在不控制发酵过程ph时发酵液活菌数达到1.1×109cfu/ml;而在发酵过程ph控制于ph5.5时发酵液活菌数达到3.5×109cfu/ml达到不控制ph时的3.18倍。表1发酵乳杆菌whh3906和植物乳杆菌1701高密度发酵工艺优化截止实行例2:可控制体沉的益生菌片剂一种可控制体沉的益生菌片剂包括发酵乳杆菌冻搞粉10份、植物乳杆菌冻搞粉10份、白芸豆提取物5份、绿咖啡豆提取物5份、蓝莓粉5份、生姜粉5份、菊粉20份、赤藓糖醇20份、直压型辅料18.95份、维生素c0.05份和硬脂酸镁1份。所述发酵乳杆菌冻搞粉植物乳杆菌冻搞粉中的活菌数均为3×109cfu/g。所述直压型辅料为直压型麦芽糖醇。所述植物乳杆菌冻搞粉的制备办法包括以下办法:1)培养基的制备所述培养基为矫正mrs培养基其配方为葡萄糖20g、牛肉膏13g、胰蛋白胨5g、大豆蛋白胨7g、酵母粉6g、醋酸钠3g、柠檬酸氢二铵1g、磷酸氢二钾3g、硫酸镁0.6g、半胱氨酸盐酸盐0.4g、吐温-801ml、一水合硫酸锰0.2g水1000ml;安排其ph为6.5;2)菌株保护剂的制备所述菌株保护剂配方为脱脂乳80g/l海藻糖100g/l甘油20g/l;3)以5%接种量将植物乳杆菌1701接种于发酵基质中进行发酵培养发酵温度为38℃发酵时间为15h发酵过程ph控制于ph5.0;4)发酵中断后取发酵产品离心去除上清液;离心转速5,000rpm离心时间8min;5)将离心赢得的积聚物与菌株保护剂混共离心赢得的积聚物与菌株保护剂的混共沉量比率为1:1.5;6)冻搞;7)冻搞产品破坏、过筛赢得植物乳杆菌冻搞菌粉;筛网采用15手段准筛。所述发酵乳杆菌冻搞菌粉的制备办法包括以下办法:将办法3)中的植物乳杆菌1701换成发酵乳杆菌whh3906反复办法1)-7)赢得发酵乳杆菌冻搞粉。一种上述益生菌片剂的制备办法包括以下办法:(1)依照沉量份配比称取各本料备用;(2)将维生素c0.05份与直压型麦芽糖醇1.95份混共均匀赢得混共后小料;(3)将发酵乳杆菌冻搞粉10份、植物乳杆菌冻搞粉10份、白芸豆提取物5份、绿咖啡豆提取物5份、蓝莓粉5份、生姜粉5份、菊粉20份、赤藓糖醇20份、直压型麦芽糖醇17份与混共后小料所有混共均匀即得初混共物;混共转速为35rpm混共时间为20min;(4)将所得初混共物与硬脂酸镁1份混共均匀赢得总混共半成品;混共转速为25rpm混共时间为20min;(5)将所得总混共半成品用压片机压片即得片剂;压片过程中压片压力为16kn;(6)将步所得片剂用包装瓶包装即得成品;包装所用包装瓶采用内置搞燥剂的高密度聚乙烯(hdpe)包装瓶。个中办法(1)-(6)中安排过程理想在十万级gmp车间中恒温恒湿情况中进行温度为18℃湿度为40%。所得片剂成品进行闭领袖标检测所得检测截止如表2。表2实行例2所得成品的检测截止实行例3:可控制体沉的益生菌片剂一种可控制体沉的益生菌片剂包括发酵乳杆菌冻搞粉5份、植物乳杆菌冻搞粉5份、白芸豆提取物10份、绿咖啡豆提取物10份、蓝莓粉10份、生姜粉10份、菊粉10份、赤藓糖醇10份、直压型辅料29.5份、维生素c0.3份和硬脂酸镁0.2份。所述发酵乳杆菌冻搞粉、植物乳杆菌冻搞粉中的活菌数均为1×1011cfu/g。所述直压型辅料为直压型山梨糖醇。所述植物乳杆菌冻搞粉的制备办法包括以下办法:1)培养基的制备所述培养基为矫正mrs培养基其配方为葡萄糖20g、牛肉膏10g、胰蛋白胨5g、大豆蛋白胨5g、酵母粉5.5g、醋酸钠4g、柠檬酸氢二铵1.5g、磷酸氢二钾2g、硫酸镁0.6g、半胱氨酸盐酸盐0.4g、吐温-801ml、一水合硫酸锰0.23g水1000ml;安排其ph为6.5;2)菌株保护剂的制备所述菌株保护剂配方为脱脂乳80g/l海藻糖100g/l甘油20g/l;3)以10%接种量将植物乳杆菌1701接种于发酵基质中进行发酵培养发酵温度为37℃发酵时间为16h发酵过程ph控制于ph5.5;4)发酵中断后取发酵产品离心去除上清液;离心转速8,000rpm离心时间10min;5)离心赢得的积聚物与菌株保护剂混共离心赢得的积聚物与菌株保护剂的混共沉量比率为1:2;6)冻搞;7)冻搞产品破坏、过筛赢得发酵乳杆菌whh3906冻搞粉、植物乳杆菌1701冻搞菌粉;筛网采用60手段准筛。所述发酵乳杆菌冻搞菌粉的制备办法包括以下办法:将办法3)中的植物乳杆菌1701换成发酵乳杆菌whh3906反复办法1)-7)赢得发酵乳杆菌冻搞粉。一种上述益生菌片剂的制备办法包括以下办法:(1)依照沉量份配比称取各本料备用;(2)将维生素c0.3份与直压型山梨糖醇1.7份混共均匀赢得混共后小料;(3)将发酵乳杆菌冻搞粉5份、植物乳杆菌冻搞粉5份、白芸豆提取物10份、绿咖啡豆提取物10份、蓝莓粉10份、生姜粉10份、菊粉10份、赤藓糖醇10份、直压型辅料27.8份与混共后小料所有混共均匀即得初混共物;混共转速为30rpm混共时间为15min;(4)将所得初混共物与硬脂酸镁0.2份混共均匀赢得总混共半成品;混共转速为15rpm混共时间为10min;(5)将所得总混共半成品用压片机压片即得片剂;压片过程中压片压力为14kn;(6)将所得片剂用包装瓶包装即得成品;包装所用包装瓶采用内置搞燥剂的高密度聚乙烯(hdpe)包装瓶。个中办法(1)-(6)中安排过程理想在十万级gmp车间中恒温恒湿情况中进行温度为20℃湿度为30%。所得片剂成品进行闭领袖标检测所得检测截止如表3。表3实行例3所得成品的检测截止实行例4:减肥效验本实行例依据国度保健食物锻炼与评介本领典型进行在前提饲猜中增添15%蔗糖、15%猪油、10%酪蛋白来诱发雄性大鼠肥肥。共时灌胃植物乳杆菌1701和发酵乳杆菌whh3906、除2株菌外的十脚辅料以及完备减肥拉拢物期间每周闭于大鼠摄食量和体沉进行监测结果检测大鼠体沉、肝脏和脂肪沉量、粪便中甘油三脂和总胆固醇的含量来估计该拉拢物是否具备缩小大鼠体沉的功效。1试验和分组本实行例将大鼠分成9组各组的大鼠数目和处置办法睹表4。个中试验组1、试验组3、试验组4和试验组5采用的植物乳杆菌冻搞菌粉和发酵乳杆菌冻搞菌粉与实行例3中的沟通;试验组2和试验组3采用的辅猜中各辅料的配比与实行例3沟通;试验组1-9中灌胃液体中的溶剂均为0.85%心理盐水。表4试验分组及组别处置办法2试验办法采用6-8周龄的spf级雄性大鼠(200±20g)动作试验闭于象。动物豢养保护情况温度为21±2℃湿度为30%-70%12h光照代替自在饮水自在摄入饲料。饲料购自江苏省协共医药生物工程有限负担公司前提饲料重要由鱼粉、小麦、玉米、豆粕、麸皮等构成高脂饲料是在前提饲猜中增添15%蔗糖、15%猪油、10%酪蛋白。符合期中断后先随机分成2组10只大鼠赋予平常饲料动作空白组150只赋予高脂饲料动作模型组每周监测摄食量和体沉。饲喂2周后将模型组大鼠按体沉增沉排序去除体沉增沉较矮的1/3肥肥保卫大鼠。将结余的100只肥肥大鼠按体沉随机分成10组分别为模型组和9个试验组。模型组和试验组赋予高脂饲料空白组赋予平常饲料。9个试验组分别灌胃相应的受试样品模型组和空白组均赋予等量的心理盐水。灌胃时间为10周功夫监测每周的摄食量和体沉。考查中断后称体沉1%戊巴比妥钠(0.5ml/100gbw)麻醉解剖称取肾四周脂肪、睾丸四周脂肪以及肝脏构造。取粪便用试剂盒检测粪便中tc和tg的含量。3试验截止3.1造模功夫大鼠的体沉变革依据表5可知与模型组比拟第2周空白组大鼠的体沉明显矮于模型组(p<0.01)证明大鼠肥肥模型树立成功。表5造模功夫大鼠体沉变革*:展现与模型组比拟分别明显p<0.05;**:展现与模型组比拟分别极明显p<0.01。3.2大鼠逐日摄食量和能量摄入量依据表6可知试验功夫空白组大鼠的逐日摄食量明显高于模型组(p<0.05)然而空白组大鼠的逐日能量摄入量明显矮于模型组(p<0.05);而模型组和9个试验组之间无明显分别(p>0.05)表明摄入植物乳杆菌和发酵乳杆菌、减肥拉拢物中的辅料、各辅料与乳杆菌的拉拢以及完备减肥拉拢物均不效率高脂饮食大鼠逐日的摄食量和能量摄入量。表6逐日摄食量和能量摄入的变革组别摄食量(g/d)日能量摄入(kcal/d)空白组20.45±0.49**73.95±1.78*模型组18.25±0.6280.08±2.67试验组118.84±0.3279.07±1.38试验组218.93±0.4279.45±0.32试验组318.57±0.3280.49±0.32试验组418.53±0.4780.23±1.21试验组518.41±0.3379.72±1.27试验组618.65±0.5080.22±0.97试验组718.73±0.3680.13±1.23试验组818.55±0.4380.05±1.08试验组918.70±0.3879.87±1.53*:展现与模型组比拟分别明显p<0.05;**:展现与模型组比拟分别极明显p<0.01。3.3试验功夫大鼠的体沉变革试验功夫各个组别大鼠的体沉变革如表7所示从中不妨瞅出:(1)空白组(第10周时达到421.60±18.21g)的大鼠体沉终究明显矮于模型组(第10周时达到515.38±18.78gp<0.01);(2)试验组2、4、5的大鼠体沉从第5周发端矮于模型组(p<0.05)且二者分别渐渐增大其体沉在第10周时间别达到477.78±21.07g、479.13±19.14g和481.80±19.11g表明植物乳杆菌1701、发酵乳杆菌whh3906大概是除菌之外的辅料亦具备杰出的减肥效验;(3)试验组1的大鼠体沉在第5周时明显矮于试验组4和5且体沉分别渐渐增大至第10周时平稳体沉为463.56±17.85g表明植物乳杆菌1701与发酵乳杆菌whh3906协共运用后在控制体沉减少上能表现协共效率其效率效验优于单株菌;(4)试验组3的大鼠体沉在第5周发端矮于试验组1和2且差异渐渐增大表明辅料与二株菌协共运用后在控制体沉减少上能表现协共效率其效率效验优于二株菌大概者十脚辅料径自运用;(5)试验组6、7、8、9的大鼠体沉从第5周发端明显矮于模型组(p<0.05)且2者分别渐渐增大其体沉在第10周时间别达到443.61±18.94g、446.39±19.58g、447.50±18.67g和445.21±17.66g表明植物乳杆菌1701、发酵乳杆菌whh3906与不共简单辅料复合运用亦具备杰出的减肥效验;而试验组6、7、8、9的大鼠体沉在第10周时均明显矮于试验组1(p<0.01)表明蓝莓粉、生姜粉、菊粉、赤藓糖醇这四种辅料与二株菌协共运用后在控制体沉减少上均能表现协共效率;(6)试验组3的大鼠体沉从第4周发端明显矮于模型组(p<0.05)并从第6周发端二者之间差异拉大(p<0.01)其平稳体沉在第10周时达到439.00±16.49g证明本创造中二株菌与其他辅料的完备拉拢物能减速高脂饮食的大鼠体沉减少;而且试验组3的效验较试验组1、2、4、5、6、7、8、9更好减肥效验最佳完备拉拢物展现出菌株与菌株之间、菌株和其他辅料之间的协共增效效率。表7大鼠的体沉变革组别第0周(g)第5周(g)第10周(g)空白组275.70±11.22*363.00±19.32**421.60±18.21模型组306.10±9.88428.44±15.35515.38±18.78试验组1306.40±10.53402.71±18.33*463.56±17.85**试验组2306.60±11.08411.13±20.34*477.78±21.07**试验组3306.20±11.23398.22±16.78*439.00±16.49**试验组4306.70±9.87404.71±17.32*479.13±19.14**试验组5306.30±10.04406.55±18.56*481.80±19.11**试验组6305.98±10.56401.10±18.33*443.61±18.94**试验组7306.00±10.47399.95±19.73*446.39±19.58**试验组8306.55±11.00400.55±17.91*447.50±18.67**试验组9306.21±10.29400.46±19.11*445.21±17.66***:展现与模型组比拟分别明显p<0.05;**:展现与模型组比拟分别极明显p<0.01。3.4大鼠的肝脏、脂肪沉演变革依据表8可知:(1)因为高脂饮食的效率大鼠的肝脏和脂肪沉量明显升高(p<0.05p<0.01);(2)9个试验组的处置均有帮于缩小肝脏和脂肪沉量的减少个中灌胃完备拉拢物的试验组3的效验最佳表明2株菌和其他辅料共同的完备拉拢物表展现最强的缩小脂肪积聚、降矮脏器比和体脂比的效率;(3)试验组1的大鼠肝脏沉、脏器比、脂肪沉和体脂比明显矮于试验组4和5表明植物乳杆菌1701与发酵乳杆菌whh3906协共运用后在缩小脂肪积聚、降矮脏器比和体脂比上能表现协共效率;(4)试验组3的大鼠肝脏沉、脏器比、脂肪沉和体脂比明显矮于试验组1和2表明辅料与二株菌协共运用后在缩小脂肪积聚、降矮脏器比和体脂比上能表现协共效率;(5)试验组6、7、8、9的大鼠肝脏沉、脏器比、脂肪沉和体脂比明显矮于试验组1表明蓝莓粉、生姜粉、菊粉、赤藓糖醇这四种辅料与二株菌协共运用后在缩小脂肪积聚、降矮脏器比和体脂比上均能表现协共效率。表8大鼠的肝脏和脂肪沉量组别肝脏沉(g)脏器比(%)脂肪沉(g)体脂比(%)空白组14.25±0.84**3.38±0.11**22.30±1.90**5.29±0.34**模型组22.32±1.124.33±0.1443.29±2.778.40±0.35试验组117.29±1.30**3.73±0.17**32.72±2.19**7.06±0.39*试验组218.20±1.23**3.81±0.13**33.15±1.96**6.94±0.38**试验组314.88±0.97**3.39±0.11**29.93±1.33**6.82±0.34**试验组418.30±1.03**3.82±0.14**34.73±1.21**7.25±0.30*试验组518.65±0.84*3.87±0.11**35.26±1.02*7.32±0.23*试验组615.88±0.78**3.58±0.12**30.52±1.52**6.88±0.33*试验组715.84±0.92**3.55±0.14**30.76±1.11**6.89±0.25*试验组816.11±1.08**3.60±0.13**30.74±1.23**6.87±0.37*试验组915.89±0.97**3.57±0.11**30.54±1.64**6.86±0.29**:展现与模型组比拟分别明显p<0.05;**:展现与模型组比拟分别极明显p<0.01。3.5大鼠粪便中甘油三脂(tg)和总胆固醇(tc)含量的变革依据表9可知:(1)空白组大鼠粪便中的tc含量明显矮于模型组(p<0.01)且tg含量明显高于模型组(p<0.01)这与摄入饲料的脂质含量不公有闭;(2)闭于于粪便中消除的tc含量试验组3和试验组1、4、5、6、7、8、9的大鼠粪便中其含量明显高于模型组(p<0.01和p<0.05)且试验组3的消除量高于其他7个试验组而试验组2的tc消除量虽高于模型组然而未达到明显性分别(p>0.05)。而闭于于tg消除量发本质验组3和试验组1、2、4、6、7、8、9粪便中的tg含量明显高于模型组(p<0.05)且试验组5的tg消除量虽有所升高然而未达到明显分别(p>0.05)。这表明径自服用辅料闭于促进体内tc和tg外排有较大的效验而且植物乳杆菌和发酵乳杆菌的共同运用、2株菌与辅料共同的完备拉拢物均具备促进摄入的脂质外排的效率然而完备拉拢物的效验更好表展现菌株与其他辅料协共效率促进脂质外排;(3)试验组1的大鼠tc消除量明显高于试验组4和5表明植物乳杆菌1701与发酵乳杆菌whh3906协共运用后在促进tc消除上能表现协共效率;(4)试验组3的大鼠tc消除量明显高于试验组1和2表明辅料与二株菌协共运用后在促进tc消除上能表现协共效率;(5)试验组6、7、8、9的大鼠tc消除量亲近于试验组1因为辅料不具备明显的促进tc消除的效率(依据试验组2的截止可知)因而能表明蓝莓粉、生姜粉、菊粉、赤藓糖醇这四种辅料均能普及二株菌促进tc消除的效验。表9大鼠粪便中甘油三脂和总胆固醇的含量组别tc(μmol/g)tg(μmol/g)空白组4.47±0.96**4.86±0.56**模型组14.67±1.173.30±0.74试验组119.71±0.79*3.89±0.39*试验组216.67±0.944.00±0.35*试验组321.33±1.06**4.10±0.52*试验组417.47±1.21*3.91±0.43*试验组517.34±0.89*3.86±0.25试验组619.99±0.64*4.02±0.31*试验组719.85±1.17*3.95±0.29*试验组819.91±0.87*3.92±0.33*试验组919.89±0.91*3.99±0.49**:展现与模型组比拟分别明显p<0.05;**:展现与模型组比拟分别极明显p<0.01。综上所述植物乳杆菌1701和发酵乳杆菌whh3906、减肥菌剂中的辅料均展现出降矮体沉、缩小体内脂肪积聚、降矮脏器比和体脂比以及促进脂质外排的效率。2株菌之间以及菌株与辅料之间具备协共效率相较于径自服用而言复配后不妨展现出更好的减肥效验。实行例5:发酵乳杆菌whh3906的生物学本质本创造所供给的菌株经审定属于发酵乳杆菌(lactobacillusfermentum)定名为whh3906菌株于2020年3月13日在华夏微生物菌种收躲控制委员会普遍微生物菌种收躲核心收躲微生物收躲编号为cgmccno.19472。本创造所供给的菌株发酵乳杆菌whh3906是从尔国西躲自治区采集的酥油平分别赢得。本创造所供给的菌株发酵乳杆菌whh3906的生物学本质如下:形态学特性:在mrs琼脂培养基中成长形态为乳白色圆形菌降表面光润潮湿、边际纯洁、不通明、核心杰出。革兰氏染色呈典范阳性显微镜下参瞅细胞呈短杆状无鞭毛不产芽孢不疏通(图1所示)。培养特性:最适成长温度为37℃兼性厌氧生善于mrs培养基中。心理特性:运用api50chl体系。表10中列出了本创造菌株发酵乳杆菌whh3906的api50chl尝试的截止。表10api50截止甘油─甘霖醇─d-松三糖─赤藻糖醇─山梨醇─d棉子糖+d-阿拉伯糖─甲基-αd吡喃甘霖糖苷─淀粉─l-阿拉伯糖─甲基-αd吡喃葡萄糖苷─糖本─d-核糖+n-乙酰葡萄糖胺─木糖醇─d-木糖+苦杏仁苷─d-龙胆二糖─l-木糖─arbulin─d-土伦糖─d-侧金盏花醇─七叶灵柠檬酸铁─d-来苏糖─甲基-βd吡喃木糖苷─水杨苷─d-塔格糖─d-半乳糖+d-纤维二糖─d-岩藻糖─d-葡萄糖+d-麦芽糖+l-岩藻糖─d-果糖+d-乳糖+d-阿拉伯醇─d-甘霖糖+d-密二糖+l-阿拉伯醇─l-山梨糖─d-蔗糖+葡萄糖酸钾+l-鼠李糖─d-海藻糖─2酮基葡萄糖酸钾─卫茅醇─菊粉─5酮基葡萄糖酸钾+肌醇─生物学审定:针闭于16srrna基因序列测序截止如seqidno:1所示将序列于ncbi的genbank数据库中进行共源性比闭于领会截止表露该菌株为发酵乳杆菌(lactobacillusfermentum)。实行例6:发酵乳杆菌whh3906的培养本创造菌株发酵乳杆菌whh3906经二代活化后按1%接种量接种于mrs培养基中在37℃温度下培养24h每隔1h取样一次测定在600nm波长的光密度(od)值画制成长曲线树立三次反复。截止如图2所示发酵乳杆菌whh3906在经过0-2h的渐渐期后从2h发端赶快成长加入闭于数成长久13h中断闭于数期加入宁静期。实行例7:发酵乳杆菌whh3906的耐酸耐胆盐本能本创造菌株发酵乳杆菌whh3906、闭于照贸易菌株搞酪乳杆菌代田株(lcs)和闭于照贸易菌株鼠李糖乳杆菌gg(lgg)经二代活化后取闭于数成长末期菌液4000rpm离心10min弃上清赢得菌泥分别进行如下安排:①介入沟通体积ph2.5的mrs溶液吹挨混匀后在37℃情况下孵育用稀释涂布计数法测定0点及孵育1h、2h、4h后菌数的变革;②介入沟通体积的含0.3%胆盐的mrs溶液吹挨混匀后在37℃情况下孵育用稀释涂布计数法测定0点及孵育4h、8h后菌数的变革树立三次反复。菌株成活率估计公式:菌株成活率(%)=n1/n0*100%。n1为菌株孵育后活菌数的log10值n0为菌株初始活菌数的log10值。截止如表11所示本创造菌株发酵乳杆菌whh3906具备杰出的耐受个性。在ph2.5情况下孵育2h成活率为98.97%孵育4h成活率为97.48%明显优于闭于照贸易菌株lcs与闭于照贸易菌株lgg相当。在0.3%胆盐浓度下孵育4h成活率为80.38%孵育8h成活率为79.85%且4-8h活菌数基础不变革而闭于照贸易菌株lcs和lgg未检测到活菌数。证明发酵乳杆菌whh3906具备杰出的胃酸和胆盐耐受个性优于闭于照贸易菌株lcs和lgg。表11耐受性截止-:未检测到。实行例8:发酵乳杆菌whh3906的黏附性树立ht-29细胞培养体系细胞生善于含10%胎牛血清的dmem培养基中(含青霉素100u/ml链霉素100mg/ml)。待细胞传至第三代采用0.25%的胰酶(含edta)消食赢得单细胞悬液细胞以1×106细胞/孔的密度接种于已放置细胞爬片的12孔细胞培养板中于37℃5%co2培养箱中培养2d。本创造菌株发酵乳杆菌whh3906、闭于照贸易菌株搞酪乳杆菌代田株(lcs)和闭于照贸易菌株鼠李糖乳杆菌gg(lgg)经二代活化后取闭于数成长末期菌液4000rpm离心10min弃上清赢得菌泥沉悬于含10%胎牛血清的dmem实脚培养基(不加双抗)中取2×108cfu/ml的菌液1ml接种于上述12孔细胞培养板中37℃下于5%co2培养箱中孵育2h。孵育中断后渐渐吸去培养液用pbs清洗3次用100%甲醇固定8min。取出细胞爬片静置20min经革兰氏染色后用中性树脂封片。于光学显微镜下进行参瞅树立三次反复每个电影随机采用10个视线计数。截止如表12和图3所示发酵乳杆菌whh3906的单细胞黏附数达7.01±0.86明显优于闭于照贸易菌株lcs和lgg(1.51±0.305.25±0.78)。表12黏附性截止菌株编号黏附率(菌数/细胞数)lcs1.51±0.30algg5.25±0.78bwhh39067.01±0.86cabc:p<0.05。实行例9:发酵乳杆菌whh3906的减肥功效本创造依据国度保健食物控制规则的有闭决定采用大鼠在前提饲猜中增添15%蔗糖、15%猪油、10%酪蛋白来诱发大鼠肥肥症。共时灌胃发酵乳杆菌whh3906菌株活菌数1×109cfu/ml期间每周闭于大鼠摄食量和体沉进行检测结果检测大鼠体沉和脂肪含量来估计该菌株是否具备缩小大鼠体沉的功效。将兴盛的spf级雄性大鼠(6-8周龄200±20g)符合7黎明随机分为3组每组10只。动物豢养保护情况温度为21±2℃湿度为30-70%12h光照代替自在饮水自在摄入饲料考查周期为8周。分组如下:闭于照组:前提饲料豢养;模型组:高脂饲料豢养造模开辟肥肥模型;试验组:高脂饲料豢养造模灌胃本创造菌株发酵乳杆菌whh3906菌悬液灌胃剂量为1×109cfu/d;饲料购自江苏省协共医药生物工程有限负担公司前提饲料重要由鱼粉、小麦、玉米、豆粕、麸皮等构成总能:3616kcal/kg;高脂饲料是在前提饲猜中增添15%蔗糖、15%猪油、10%酪蛋白总能:4334kcal/kg。考查中断后称体沉1%戊巴比妥钠(0.5ml/100gbw)麻醉采用心脏穿刺取血获得大鼠血液样品将血液样品取出后静置30min4℃4000rpm离心15min取上清用elisa试剂盒检测血清中总胆固醇、甘油三酯和瘦素含量。脱颈正法后解剖取肝脏、肾四周脂肪、睾丸四周脂肪并称沉估计脏器比和体脂比。由图4可知试验组的摄食量(图4a)和能量摄入量(图4b)共模型组之间无明显分别证明发酵乳杆菌whh3906并不是经过缩小摄食量和能量摄入降矮体沉。由图5a可知高脂饮食饲喂一周后与闭于照组比拟模型组体沉明显高于闭于照组(p<0.01)证明造模成功。与模型组比拟第0-6周试验组体沉矮于模型组然而不明显性分别第6-8周试验组体沉明显矮于模型组(p<0.05p<0.01)第8周时体沉降矮程度达8.18%。由图5b可知与模型组比拟试验组体沉总增沉明显矮于模型组(p<0.01)比模型组矮22.03%。证明发酵乳杆菌whh3906服用浓度在1×109cfu/d不妨明显降矮体沉。由图6可知与模型组比拟试验组脂肪沉和体脂比明显矮于模型组(图6a和bp<0.05p<0.01)分别比模型组降矮19.13%和13.25%。证明发酵乳杆菌whh3906菌株服用浓度在1×109cfu/d不妨明显缩小脂肪积聚和降矮体脂比。由图7可知与模型组比拟试验组血清中总胆固醇(图7a)和甘油三酯(图7b)明显矮于模型组(p<0.01p<0.05)。证明发酵乳杆菌whh3906菌株服用浓度在1×109cfu/d不妨明显降矮血脂程度。由图8可知与模型组比拟试验组血清中瘦素含量明显低沉(p<0.01)。证明发酵乳杆菌whh3906菌株服用浓度在1×109cfu/d不妨明显降矮血清癯素程度从而促进脂解和脂肪细胞凋亡制止脂肪合成缩小体内脂肪积聚缩小体沉。总之发酵乳杆菌whh3906菌株服用浓度在1×109cfu/d不妨明显降矮体沉缩小脂肪积聚降矮体脂比、血脂和血清癯素促进脂解和脂肪细胞凋亡制止脂肪合成是一株具备减肥功效的新菌株。实行例10:发酵乳杆菌whh3906缓和非酒精性脂肪肝的功效1驱除dpph自在基的本领本创造菌株发酵乳杆菌whh3906和闭于照贸易菌株鼠李糖乳杆菌gg(lgg)经二代活化后取闭于数成长末期菌液4000rpm离心10min弃上清赢得菌泥pbs(ph=7.4)清洗2次菌悬液od600调至0.5±0.1。在反应体系中介入发酵乳杆菌whh3906的菌悬液1ml再介入1ml0.1mmol/ldpph的无水乙醇溶液充溢混匀后室温下避光反应30min而后经过6000rpm离心10min取上清液测定517nm处的吸光度(od值)。以等体积的心理盐水代替样品溶液动作闭于照组并用等体积的心理盐水和无水乙醇的混共液动作空白调零。依照下式估计dpph自在基的驱除率:dpph自在基驱除率=(a0-a1)/a0×100%。a0:闭于照的od510值a1:植物乳杆菌1701菌液的od510值。如表13所示发酵乳杆菌whh3906的dpph自在基驱除率达96.24±1.06%明显高于闭于照贸易菌株lgg(驱除率为45.90±0.89%)是闭于照贸易菌株的2.10倍。证明发酵乳杆菌whh3906具备较强的抗氧化本领。表13菌株的dpph自在基驱除本领截止菌株编号lggwhh3906dpph自在基驱除率(%)45.90±0.8996.24±1.06**与贸易闭于照菌比拟**:p<0.01。2驱除羟自在基的本领本创造菌株发酵乳杆菌whh3906和闭于照贸易菌株鼠李糖乳杆菌gg(lgg)经二代活化后取闭于数成长末期菌液4000rpm离心10min弃上清赢得菌泥pbs(ph=7.4)清洗2次测定菌悬液od600。在反应体系中介入od值为5的发酵乳杆菌whh3906菌悬液1ml再介入1ml心理盐水和1mlfeso4(3mmol/l)。混匀后介入1mlh2o2(3mmol/l)室温静置10min后介入1ml水杨酸(3mmol/l乙醇融化)混匀37℃水浴20min离心取上清测定510nm处的吸光值。以等体积的心理盐水代替样品溶液动作闭于照组并用等体积的心理盐水和无水乙醇的混共液动作空白调零。依照下式估计羟自在基的驱除率:羟自在基驱除率=(as-ap)/as×100%ap:发酵乳杆菌whh3906菌液的od510值as:菌悬液换成0.9%的心理盐水的od510值。如表14所示发酵乳杆菌whh3906的羟自在基驱除率达95.01±3.54%明显高于闭于照贸易菌株lgg(驱除率为56.29±2.13%)是闭于照贸易菌株的1.69倍。证明发酵乳杆菌whh3906具备较强的抗氧化本领。表14菌株的羟自在基驱除本领截止菌株编号lggwhh3906羟自在基驱除率(%)56.29±2.1395.01±3.54**与贸易闭于照菌比拟**:p<0.01。3闭于肝脏沉量以及肝脏中的甘油三酯和总胆固醇含量的效率将兴盛的spf级雄性大鼠(6-8周龄200±20g)符合7黎明随机分为3组每组10只。动物豢养保护情况温度为21±2℃湿度为30-70%12h光照代替自在饮水自在摄入饲料。饲料购自江苏省协共医药生物工程有限负担公司前提饲料重要由鱼粉、小麦、玉米、豆粕、麸皮等构成;高脂饲料是在前提饲猜中增添15%蔗糖、15%猪油、10%酪蛋白。动物试验分组如下:闭于照组:前提饲料豢养;模型组:高脂饲料豢养造模开辟肥肥模型使大鼠爆发非酒精性脂肪肝;试验组:高脂饲料豢养造模灌胃发酵乳杆菌whh3906菌悬液灌胃剂量为1×109cfu/d;考查周期为10周考查中断后称取体沉1%戊巴比妥钠(0.5ml/100gbw)麻醉采用心脏穿刺取血获得大鼠血液样品静置30min4℃4000rpm离心15min取上清备用。脱颈正法后解剖取肝脏并称沉依照下式估计肝沉系数:肝沉系数=肝脏沉量(g)/体沉(g)×100%。肝脏称沉后用pbs缓冲液制成匀浆用试剂盒测定肝脏中甘油三酯、总胆固醇的含量。另取普遍部位肝脏以1:9体积比用4%多聚甲醛固定用于石蜡包埋切片随降后行he染色显微镜下参瞅肝脏构造形态变革。由表15可知与闭于照组比拟模型组大鼠的体沉、肝脏沉量以及肝沉系数均明显高于闭于照组(p<0.001)肝脏沉比闭于照组胜过46.17%表明大鼠已经产生非酒精性脂肪肝。与此共时试验组的体沉、肝沉明显矮于模型组(p<0.01)估计赢得的肝沉指数亦明显矮于模型组(p<0.01)。证明发酵乳杆菌whh3906在摄入剂量为1×109cfu/d时具备明显革新非酒精性脂肪肝的效率。表15大鼠的体沉、肝沉及肝沉系数组别体沉(g)肝脏沉(g)肝沉系数(%)闭于照组361.41±15.60***12.93±0.94***3.58±0.22***模型组437.01±11.1918.90±0.984.62±0.14试验组386.50±37.25**15.71±2.44**4.05±0.25***:展现与模型组比拟分别明显p<0.05;**:展现与模型组比拟分别极明显p<0.01;***:展现与模型组比拟分别极极明显p<0.001。由表16可知与闭于照组比拟模型组大鼠肝脏中的甘油三酯和总胆固醇含量明显高于闭于照组(p<0.001)证明高脂饮食会引导大鼠肝脏中脂质的减少形成非酒精性脂肪肝。共时试验组大鼠肝脏中的甘油三酯和总胆固醇含量明显矮于模型组(p<0.05和p<0.01)。证明发酵乳杆菌whh3906菌株在摄入剂量为1×109cfu/d时不妨灵验缩小肝脏中甘油三酯和总胆固醇含量的减少。表16大鼠肝脏中的甘油三酯和总胆固醇含量组别甘油三酯(mmol/l)总胆固醇(mmol/l)闭于照组21.78±4.68***0.34±0.03***模型组258.53±14.940.66±0.08试验组240.25±17.15*0.56±0.07***:展现与模型组比拟分别明显p<0.05;**:展现与模型组比拟分别极明显p<0.01;***:展现与模型组比拟分别极极明显p<0.001。构造形态学参瞅截止如图9所示闭于照组大鼠的肝脏构造构造完备细胞界限领会细胞核位于核心未创造脂肪空泡。而模型组大鼠的肝脏细胞构造被损害胞内存留洪量大小不等的脂滴会合细胞中断不清脂肪积聚明显瞅来洪量肝细胞脂肪空泡证明高脂饮食会开辟大鼠非酒精性脂肪肝的爆发。共时咱们发本质验组大鼠的肝脏细胞脂肪变性缩小脂肪空泡缩小且空泡变小。证明发酵乳杆菌whh3906菌株在摄入剂量为1×109cfu/d时不妨灵验缓和高脂饮食开辟的非酒精性脂肪肝。综上所述发酵乳杆菌whh3906菌株在摄入剂量为1×109cfu/d时可灵验缓和高脂饮食开辟的非酒精性脂肪肝缩小肝脏中甘油三酯和胆固醇的会合缩小肝脏构造脂肪变性是一株具备缓和非酒精性脂肪肝功效的菌株。实行例11:发酵乳杆菌whh3906缓和缓性炎症的功效1闭于脾淋巴细胞增殖的效率昆明小鼠豢养温度为22±2℃湿度为30-70%12h光照代替自在饮用水。昆明小鼠豢养1周后断颈正法无菌取小鼠脾脏用无菌的玻璃打针器芯将其碾碎200目金属筛网过滤后经ack细胞裂解液裂解5min介入含10%胎牛血清的无菌hank’s液中断裂解1000rpm4℃离心5min积淀沉悬于5ml含10%胎牛血清的rpmi-1640培养基。用台盼蓝染色血细胞计数板计数估计活细胞数和活细胞率。安排细胞浓度为5×106cells/ml。本创造菌株发酵乳杆菌whh3906和闭于照贸易菌株搞酪乳杆菌代田株(lcs)经二代活化后安排菌浓度为1×107cfu/ml。将细胞悬液加至96孔细胞培养板每个处置5个反复分为调零组(细胞培养基)空白闭于照组(细胞培养基+细胞悬液)开辟剂组(细胞培养基+细胞悬液+开辟剂10μg/mlcona大概10μg/mllps)菌处置组(细胞培养基+细胞悬液+开辟剂10μg/mlcona大概10μg/mllps+菌悬液1×107cfu/ml)。37℃前提下co2培养箱中培养72h。培养中断后介入mtt溶液(2.5mg/ml)37℃共孵育4h后吸出上清再介入100μldmso结果于490nm下测定吸光值。截止如表17所示在不加开辟剂的情景下闭于照贸易菌株lcs和whh3906均不妨明显促进小鼠脾淋巴细胞的增殖(分别为p<0.01和p<0.05)。在增添开辟剂cona的前提下闭于照贸易菌株lcs和whh3906均不妨灵验普及小鼠脾淋巴细胞中t淋巴细胞的增殖本领(p<0.01)而且在增添开辟剂lps的前提下whh3906在必定程度上不妨促进小鼠脾淋巴细胞中b淋巴细胞的增殖然而是闭于照贸易菌株lcs效验不是很明显。表明本创造菌株发酵乳杆菌whh3906在体外不妨灵验促进小鼠脾淋巴细胞的增殖。表17菌株闭于小鼠脾淋巴细胞增殖的效率截止处置办法空白闭于照lcswhh3906不加开辟剂0.176±0.0060.246±0.021**0.227±0.010*cona(10μg/ml)0.804±0.0580.901±0.050**0.870±0.040**lps(10μg/ml)0.803±0.0140.797±0.0140.829±0.026*:与空白闭于照比拟分别明显p<0.05;**:与空白闭于照比拟分别极明显p<0.01。2闭于脾淋巴细胞渗透炎症因子的效率依如实行例7“1闭于脾淋巴细胞增殖的效率”中小鼠脾淋巴细胞的制备办法制备脾淋巴细胞悬液安排细胞浓度为5×106cells/ml。本创造菌株发酵乳杆菌whh3906和闭于照贸易菌株搞酪乳杆菌代田株(lcs)经二代活化后安排均浓度到1×107cfu/ml。将细胞悬液介入96孔细胞培养板每个处置5个反复分为调零组(细胞培养基)空白闭于照组(细胞培养基+细胞悬液)菌处置组(细胞培养基+细胞悬液+菌悬液1×107cfu/ml)37℃前提下co2培养箱中培养48h。培养中断后1500rpm离心10min接收上清0.22μm滤膜过滤采用elisa试剂盒测定il-10和il-12含量。截止如表18所示与空白闭于照组比拟whh3906不妨明显促进脾淋巴细胞渗透细胞因子il-10达到353.75±2.25pg/ml明显高于贸易闭于照菌株(305.82±4.26pg/ml)是闭于照贸易菌株的1.16倍;共时whh3906不妨明显促进脾淋巴细胞渗透细胞因子il-12达到218.28±1.47pg/ml明显高于贸易闭于照菌株(171.96±3.68pg/ml)是闭于照贸易菌株的1.27倍。证明发酵乳杆菌whh3906不妨明显促进脾淋巴细胞渗透细胞因子且渗透il-10的本领更强具备抗炎活性。表18菌株闭于小鼠脾淋巴细胞渗透il-10和il-12的效率截止组别il-10il-12空白闭于照192.73±2.5997.24±2.28lcs305.82±4.26***171.96±3.68***whh3906353.75±2.25***###218.28±1.47***###***:与空白闭于照比拟分别极极明显p<0.001;###:与lcs比拟分别极极明显p<0.001。3闭于巨噬细胞渗透炎症因子的效率树立raw264.7细胞培养体系细胞生善于含10%胎牛血清的dmem培养基中(含青霉素100u/ml链霉素100mg/ml)。待细胞传至第三代采用0.25%的胰酶(含edta)消食赢得单细胞悬液细胞以1×106细胞/孔的密度接种于24孔细胞培养板中于37℃5%co2培养箱中培养48h。本创造菌株发酵乳杆菌whh3906和闭于照贸易菌株搞酪乳杆菌代田株(lcs)经二代活化后取闭于数成长末期菌液4000rpm离心10min弃上清赢得菌泥沉悬于含10%胎牛血清的dmem实脚培养基(不加双抗)中制成1×109cfu/ml的菌液。非炎症模型组每孔介入100μl菌悬液(1×109cfu/ml)炎症模型组每孔介入100μl菌悬液(1×109cfu/ml)和100μllps(10μg/ml)于37℃5%co2培养箱中共孵育24h。而后1500rpm离心10min接收上清0.22μm滤膜过滤采用elisa试剂盒测定no、il-10、il-6和tnf-α含量。截止如表19所示在不炎症开辟剂lps的前提下与贸易菌株比拟发酵乳杆菌whh3906促进raw264.7细胞渗透il-10的量明显高于贸易菌株(p<0.01)渗透il-6和no的量明显矮于贸易菌株(p<0.01)tnf-α渗透量与贸易菌株相当。在lps开辟的炎症前提下与贸易菌株比拟发酵乳杆菌whh3906促进raw264.7细胞渗透il-10的量明显高于贸易菌株(p<0.001)渗透il-6的量明显矮于贸易菌株(p<0.05)no和tnf-α渗透量与贸易菌株相当。表明在炎症前提下本创造菌株发酵乳杆菌whh3906不妨促进il-10渗透制止il-6、tnf-α和no渗透具备革新炎症的功效。表19菌株闭于raw264.7细胞渗透细胞因子的效率*:与空白闭于照比拟分别明显p<0.05**:与空白闭于照比拟分别极明显p<0.01***:与空白闭于照比拟分别极极明显p<0.001;#:与lcs比拟分别明显p<0.05##:与lcs比拟分别极明显p<0.01###:与lcs比拟分别极极明显p<0.001。4闭于大鼠血清中细胞因子的效率将兴盛的spf级雄性大鼠(6-8周龄200±20g)符合7黎明随机分为5组每组10只。动物豢养保护情况温度为21±2℃湿度为30-70%12h光照代替自在饮水自在摄入饲料。饲料购自江苏省协共医药生物工程有限负担公司前提饲料重要由鱼粉、小麦、玉米、豆粕、麸皮等构成;高脂饲料是在前提饲猜中增添15%蔗糖、15%猪油、10%酪蛋白。动物试验分组如下:闭于照组:前提饲料豢养;模型组:高脂饲料豢养造模开辟肥肥模型使大鼠爆发炎症;试验组:高脂饲料豢养造模灌胃发酵乳杆菌whh3906菌株悬液灌胃剂量为1×109cfu/d。考查周期为10周考查中断后称体沉1%戊巴比妥钠(0.5ml/100g体沉)麻醉采用心脏穿刺取血获得大鼠血液样品将血液样品取出后静置30min4℃4000rpm离心15min取上清用elisa试剂盒检测血清中il-1β、il-6、tnf-α、mcp-1和no的含量。脱颈正法后解剖取肝脏用elisa试剂盒检测肝脏中il-1β、il-6、tnf-α、mcp-1和no的含量。由表20可知与闭于照组比拟模型组大鼠血清中促炎因子il-1β、il-6、tnf-α、mcp-1和no的含量明显高于闭于照组(p<0.05p<0.01)证明大鼠体内已经爆发炎症。由表20可知与模型组比拟试验组大鼠血清中抑炎因子il-10程度明显高于模型组(p<0.01)促炎因子il-1β、il-6、tnf-α、mcp-1和no的含量明显矮于模型组(p<0.05p<0.01p<0.001)。证明发酵乳杆菌whh3906不妨明显降矮大鼠体内炎症程度具备缓和缓性炎症的功效。表20大鼠血清中细胞因子的浓度变革与模型组比拟*:p<0.05;**:p<0.01;***:p<0.001。由表21可知与闭于照组比拟模型组肝脏构造中促炎因子il-6、il-1β、tnf-α、mcp-1和no的含量明显高于闭于照组(p<0.05p<0.01)证明肝脏已经爆发炎症。由表21可知与模型组比拟试验组大鼠肝脏构造中促炎因子il-6、il-1β、tnf-α、mcp-1和no的含量明显矮于模型组(p<0.05p<0.01)。证明发酵乳杆菌whh3906菌株不妨明显降矮大鼠肝脏构造炎症程度具备缓和炎症的功效。表21肝脏炎症目标处置il-1β(ng/l)il-6(ng/l)tnf-α(ng/l)mcp-1(ng/l)no(ng/μl)闭于照组17.05±0.99*229.89±9.82*296.18±10.54*399.56±12.85*0.52±0.04**模型组26.81±1.39263.59±11.26325.33±10.41490.65±15.370.97±0.05试验组19.19±3.51*222.09±16.15*307.59±7.27*424.05±6.20*0.64±0.04**与模型组比拟*:p<0.05;**:p<0.01。综上所述发酵乳杆菌whh3906不妨综合安排体内多种炎症因子程度使抑炎因子程度普及、促炎因子程度降矮从而缓和机体缓性炎症。本创造中所用本料、设备若无特别证明均为本范围的常用本料、设备;本创造中所用办法若无特别证明均为本范围的常规办法。以上所述仅是本创造的较好实行例并非闭于本创勉强所有节制但凡是依据本创造本领本质闭于以上实行例所作的所有大概建改、变换以及等效变幻均仍属于本创造本领筹备的保护范畴。序列表<110>杭州娃哈哈科技有限公司<120>一种可控制体沉的益生菌片剂及其制备办法<130>2020<160>1<170>siposequencelisting1.0<210>1<211>1440<212>dna<213>发酵乳杆菌whh3906(lactobacillusfermentumwhh3906)<400>1gcggctggctcctaaaaggttaccccaccgactttgggtgttacaaactctcatggtgtg60acgggcggtgtgtacaaggcccgggaacgtattcaccgcggcatgctgatccgcgattac120tagcgattccgacttcgtgcaggcgagttgcagcctgcagtccgaactgagaacggtttt180aagagatttgcttgccctcgcgagttcgcgactcgttgtaccgtccattgtagcacgtgt240gtagcccaggtcataaggggcatgatgatctgacgtcgtccccaccttcctccggtttgt300caccggcagtctcactagagtgcccaacttaatgctggcaactagtaacaagggttgcgc360tcgttgcgggacttaacccaacatctcacgacacgagctgacgacgaccatgcaccacct420gtcattgcgttcccgaaggaaacgccctatctctagggttggcgcaagatgtcaagacct480ggtaaggttcttcgcgtagcttcgaattaaaccacatgctccaccgcttgtgcgggcccc540cgtcaattcctttgagtttcaaccttgcggtcgtactccccaggcggagtgcttaatgcg600ttagctccggcactgaagggcggaaaccctccaacacctagcactcatcgtttacggcat660ggactaccagggtatctaatcctgttcgctacccatgctttcgagtctcagcgtcagttg720cagaccaggtagccgccttcgccactggtgttcttccatatatctacgcattccaccgct780acacatggagttccactaccctcttctgcactcaagttatccagtttccgatgcacttct840ccggttaagccgaaggctttcacatcagacttagaaaaccgcctgcactctctttacgcc900caataaatccggataacgcttgccacctacgtattaccgcggctgctggcacgtagttag960ccgtgactttctggttaaataccgtcaacgtatgaacagttactctcatacgtgttcttc1020tttaacaacagag

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