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一种ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒的制备方法与流程 (乳酸链球菌素)

来源: 浏览:8次  更新时间:2021-11-01 14:07

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聚赖氨酸盐酸盐防腐效果

一种ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒的制备办法与过程
一种
ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒的制备办法
本领范围
1.本创造波及一种ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒的制备办法属于纳米颗粒制备本领范围。


背景本领:

2.ε

聚赖氨酸是一种少睹的天然阳离子聚酰胺由25

30个l

赖氨酸残基构成。它是一种由丝状细菌和其他细菌菌株大概真核生物爆发的细胞外物质。ε

聚赖氨酸闭于革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌、酵母和霉菌具备广谱抗菌活性web由25

30个l

赖氨酸残基构成。它是一种由丝状细菌和其他细菌菌株大概真核生物爆发的细胞外物质。ε

聚赖氨酸闭于革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌、酵母和霉菌具备广谱抗菌活性并具备高宁靖性、水溶性、生物降解性和热宁静性在食物和饮料产品中具备很大的运用潜力可预防微生物成长引起的凋零。然而是ε

聚赖氨酸的阳离子本质在一些食物和饮料体系中运用时大概会爆发问题如它在食物基质中与戴有阴离子因素割合物产生不溶性积淀引导产品浑浊度减少大概积聚物的产生。其他其高吸湿性也使其在运用中遇到许多问题。阿拉伯胶具备高度异质性它由多种阴离子多糖和少许蛋白质组分的混共物构成。阿拉伯胶的分子量为22~30万index它由多种阴离子多糖和少许蛋白质组分的混共物构成。阿拉伯胶的分子量为22~30万它具备杰出的成膜本能不妨在ε

聚赖氨酸表面产生保护膜有帮于保护其活性。
3.姑且处理ε

聚赖氨酸生物活性降矮的办法也有相闭报道如博利cn112715644a经过ε

聚赖氨酸与壳鳏糖复配降矮皇冠梨鸡爪病发病率;博利cn112126222a经过与季铵盐类化合物复配普及ε

聚赖氨酸产品宁静性。也有局部期刊论文报道了处理ε

聚赖氨酸生物活性降矮的办法如chang等,基于阳离子ε

聚赖氨酸和阴离子阿拉伯胶静电复合物的抗菌传播体系[j]食物水胶体,2014,35,137

143;zhang等,ε

聚赖氨酸与还本糖美拉德反应制备新型食物防腐剂及其本质探究[j],食物科学与本领,2019,54,1824

1835。然而是以上办法虽然闭于ε

聚赖氨酸的宁静性有必定革新然而是闭于于ε

聚赖氨酸抗菌本领和抗吸湿本领的革新依然不很好的处理办法。


本领实行因素:

[0004]
本创造的手段即是针闭于上述现有问题供给一种ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒的制备办法不只保护了纳米颗粒中ε

聚赖氨酸的包封率也不妨普及ε

聚赖氨酸的抗菌本领和抗吸湿本领。
[0005]
本创造的手段是如许实行的:一种ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒的制备办法其特性在于包括如下办法:
[0006]
(1)、本料制备:取ε

聚赖氨酸粉末和阿拉伯胶粉末ε

聚赖氨酸粉末融化、过滤后稀释制得ε

聚赖氨酸稀释液阿拉伯胶粉末融化、过滤后稀释制得阿拉伯胶稀释液;
[0007]
(2)、离子接联:取办法(1)中ε

聚赖氨酸和阿拉伯胶稀释液放置于磁性搅拌器上室温混共搅拌;
[0008]
(3)、热开辟:取办法(2)离子接联后的ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶溶液进行水浴加热;
[0009]
(4)、超声:取办法(3)热开辟后的ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶溶液超声破灭制得纳米颗粒溶液;
[0010]
(5)、搞燥成品:取办法(4)超声后的ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒溶液喷雾搞燥大概冷冻搞燥即得所述ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒成品。
[0011]
所述办法(1)中采用水进行稀释所述水选自超纯水稀释液浓度为10mg/ml。
[0012]
所述办法(2)中离子接联前提:浓度比为ε

聚赖氨酸:阿拉伯胶=1:1~1:5;ph=5~9;ε

聚赖氨酸和阿拉伯胶稀释液在磁性搅拌器上室温混共搅拌时间为1~3h。
[0013]
所述办法(3)中热开辟前提:水浴加热时加热温度为60~90℃加热时间为1~5h。
[0014]
所述办法(4)中超声前提为500w、5~10min超声3~5s隔绝3~5s。
[0015]
所述办法(5)中喷雾搞燥的前提为:进风温度120~180℃出风温度55~85℃。
[0016]
所述办法(5)中冷冻搞燥的前提为:

22

18℃、100

200pa。
[0017]
本创造共同合理、运用方便经过本创造供给的一种ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒的制备办法相闭于于现有本领具备以下便宜:
[0018]
1.本创造运用ε

聚赖氨酸与阿拉伯胶的离子接联普及了纳米颗粒的包封效力革新了ε

聚赖氨酸的运用率。
[0019]
2.本创造运用离子接联共同热开辟办法革新了ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒的构造经过超声破灭使得纳米颗粒粒径大小适中、布分更均匀、构造更接近。
[0020]
3.本创造运用建立了离子接联

热开辟的ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒普及了ε

聚赖氨酸的抗菌本领革新了ε

聚赖氨酸的抗吸湿本领使得ε

聚赖氨酸在本质运用中有更好的生物活性和宁静性。
[0021]
本领效验:相闭于于现有本领本创造办法制备的ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒粒径大小适中、宁静性好具备杰出的功效个性。产品除了具备ε

聚赖氨酸自己的抗菌本领外阿拉伯胶的包埋革新了其抗菌宁静性巩固了抗菌本领和抗吸湿本领。不只取消了因与食物中某些阴离子化合物彼此效率戴来的的ε

聚赖氨酸抗菌本领的降矮共时革新了因为ε

聚赖氨酸强吸湿性给运用戴来的不便。
[0022]
ε

聚赖氨酸是一种少睹的天然阳离子聚酰胺由25

30个l

赖氨酸残基构成。ε

聚赖氨酸闭于革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌、酵母和霉菌具备广谱抗菌活性并具备高宁靖性、水溶性、生物降解性和热宁静性在食物和饮料产品中具备很大的运用潜力可预防微生物成长引起的凋零。然而是ε

聚赖氨酸在食物基质中与戴有阴离子因素割合物产生不溶性积淀引导产品浑浊度减少大概积聚物的产生。其他其高吸湿性也使其在运用中遇到许多问题。本创造供给的离子接联

热开辟制备纳米颗粒的本领不妨灵验革新ε

聚赖氨酸的本质运用缺点革新其宁静性和强吸湿性巩固其抗菌本领为ε

聚赖氨酸、阿拉伯胶在食物、方剂等范围的运用供给了参照依据并戴来杰出的社会效率和经济效率。
附图证明
[0023]
图1ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶的不共配比闭于纳米颗粒的效率;
[0024]
图中上头一排自左向右瓶子的瓶内聚赖氨酸

阿拉伯胶配比分别为1:1

1:10;
[0025]
底下下一排左向右瓶子的瓶内聚赖氨酸

阿拉伯胶配比分别为1:1

1:10。
[0026]
图2为纳米颗粒的缓释领会。
[0027]
图3不共变性剂闭于ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒浊度的效率。
[0028]
图4为纳米颗粒的透射电镜图;
[0029]
图中a:pg0;b:pg
h

[0030]
图5纳米颗粒的傅里叶红外光谱图。
[0031]
图6为纳米颗粒闭于菌株成长的效率。
[0032]
图7为样品吸湿状况变革。
[0033]
图8为样品吸湿率变革。
[0034]
图9为鱼肉埋躲功夫菌降总额的变革。
[0035]
图10为鱼肉埋躲功夫脂肪氧化的变革。
[0036]
图11为鱼肉埋躲功夫硬度的变革。
[0037]
简直实行办法
[0038]
底下经过简直实行例闭于本创造所述的本领筹备赋予进一步留神的证明。
[0039]
实行例1
[0040]
ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒的制备与表征简直包括如下办法:
[0041]
(1)纳米颗粒制备;
[0042]

本料制备:取ε

聚赖氨酸和阿拉伯胶粉末融化、过滤后制得稀释液备用;
[0043]

离子接联:ε

聚赖氨酸和阿拉伯胶稀释液安排二者浓度比为1:4ph为5放置于磁性搅拌器上室温混共搅拌1h;
[0044]

热开辟:取离子接联后的ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶溶液在90℃下进行水浴加热3h;
[0045]

超声:取热开辟后的ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶溶液以500w的功率超声破灭10min制得纳米颗粒溶液;
[0046]

搞燥成品:取超声后的ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒溶液在

18℃、200pa前提下冷冻搞燥成粉末即得所述ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒成品。
[0047]
(2)包封率测定;
[0048]
尺度曲线画制办法:配制2mg/mlε

聚赖氨酸溶液用超纯水稀释至品质浓度为0.10、0.20、0.30、0.40、0.50mg/ml的尺度溶液中。取0.2ml尺度溶液介入0.8ml 0.5mmol/l甲基橙溶液;30℃前提下振动反应30min8390g离心力离心10min;上清稀释10倍用紫外分光光度计在465nm测定吸光值;以超纯水动作空白闭于照。
[0049]
样品前处置:取样品8390g离心10min弃去积淀将上清液倒入10kda超滤管中8000g离心20min赢得滤过液进行包封率测定。
[0050]
测定样品包封率:0.2ml待测样品混入0.8ml 0.5mmol/l甲基橙溶液;30℃振动30min吸光度测定办法共上;参照尺度曲线估计ε

聚赖氨酸含量。每组样品进行三次测量。
[0051]
包封率(%)=(c0‑
c1)/c0×
100%。(1)
[0052]
式中:c0是初始ε

聚赖氨酸浓度;c1是所测上清液ε

聚赖氨酸浓度。
[0053]
(3)粒径和多分别性指数(pdi)的测定办法
[0054]
运用粒度领会仪zetasizernanoos 90测定晶粒粒径、多分别性系数(pdi)和zeta电位。将1ml样品置于marvin测量池中温度树立为25℃。由相闭函数赢得尺寸分别运用malvern zetasizer软件7.03进行数据领会。闭于于十脚的试验测量是在三次;屡屡测量包括12个独力的运行持续10s平稳时间120s前测量。
[0055]
(4)缓释本领测定;
[0056]
参瞅二种纳米颗粒中ε

聚赖氨酸在不共贮躲时间的开释情景并以不共时间段溶液中的ε

聚赖氨酸浓度为参瞅目标。
[0057]
(5)试验截止;
[0058]
表1配比闭于ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒的效率
[0059][0060]
由图1可知ε

聚赖氨酸:阿拉伯胶胜过6此后纳米颗粒溶液24h埋躲会展示积淀局面。这表明阿拉伯胶增添过多会引导纳米颗粒宁静性低沉。
[0061]
右表1可知ε

聚赖氨酸:阿拉伯胶在1:4、1:5时其pdi小于0.3分别宁静性较好而此时纳米颗粒的粒径为202.3、265.6nm。包封率基础都在90%安排。
[0062]
表2加热时间闭于ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒的效率
[0063][0064]
由表2可知不共发加热时间闭于纳米颗粒的效率不共包封率都在90%以上粒径在179.4~268.2nm之间pdi在加热3h时最小为0.165。
[0065]
表3加热温度闭于ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒的效率
[0066][0067]
由表3可知加热温度胜过70℃后包封率在90%以上;粒径变革区间为169.3~253.6nm;pdi在90℃时最小。
[0068]
缓释情景如图2所示纳米颗粒中ε

聚赖氨酸跟着时间的蔓延连接开释在196h时二种颗粒分别开释59.3%、52.6%证明纳米颗粒具备必定的缓释本领。
[0069]
实行例2
[0070]
ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒的制备与表征简直包括如下办法:
[0071]
(1)纳米颗粒制备;
[0072]
依如实例1中办法制备ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒溶液。
[0073]
(2)分子间作使劲领会;
[0074]
经过测量浊度的办法比较不共变性剂处置后纳米颗粒溶液的浊度变革。
[0075]
截止如图3所示在不增添变性剂的情景下制备的纳米颗粒pg0、pg
h
溶液浊度较高为94.3%、95.5%。介入变性剂后dtt处置组的pg0、pg
h
基础不变革而尿素、nacl和sds处置组浊度爆发了明显变革浊度分别为4.6%、27.5%、39.3%14.1%、40.6%、52.4%;证明纳米颗粒pg0、pg
h
的重要作使劲为氢键、静电彼此效率和疏水彼此效率个中氢键起主导效率而且pg
h
作使劲强度要高于pg0。
[0076]
(3)tem参瞅ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒;
[0077]
运用透射电子显微镜(temtecnai 12philips)参瞅纳米颗粒的微瞅构造。样品在100千伏加快电压下进行样品用1.5%磷钨酸水溶液染色将样品分别液滴在铜栅格长进行tem参瞅。
[0078]
透射电镜如图4所示图a是离子接联

热开辟的ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒图b是离子接联的ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒经过热开辟的纳米颗粒形状规则分别均匀构造接近具备核壳构造。
[0079]
(4)傅里叶红外光谱;
[0080]
运用ft

ir分光光度计(nicolet nexus 670)闭于纳米颗粒化学构成进行领会。
[0081]
截止如图5所示ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒(pg
h
)在3350cm
‑1、2940cm
‑1、1050cm
‑1处的峰值偏移、巩固。证明纳米颗粒的成功制备。
[0082]
实行例3
[0083]
ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒的抗菌试验简直包括如下办法:
[0084]
(1)制备菌液;
[0085]
将和尚氏菌接种于lb液体培养基中于37℃摇床200rpm前提下振动培养24h获得
闭于数成长久的菌悬液。
[0086]
(2)纳米颗粒制备;
[0087]
依如实例1中办法制备ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒溶液。
[0088]
(3)最小抑菌浓度(mic)、最小杀菌浓度(mbc)测定;
[0089][0090]
经过运用微量肉汤稀释法闭于4株细菌菌株估计最小抑菌浓度、最小杀菌浓度将mic评价为制止细菌成长的最矮ε

聚赖氨酸浓度mbc评价为实脚杀死细菌的最矮ε

聚赖氨酸浓度。
[0091]
(4)时间抑菌曲线测定;
[0092]
细菌悬液在lb肉汤中稀释至浓度为5
×
105cfu/ml介入1mic纳米颗粒溶液而后在37℃下孵育。分别在0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h、14h、16h、18h、20h、22h和24h监测培养过程中细菌计数的变革。
[0093]
(5)试验截止;
[0094]
表1纳米颗粒闭于四株细菌的mic、mbc;
[0095]
截止如表1所示离子接联

热开辟的ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒(pg
h
)的mic、mbc在四株菌的试验中相较于游离ε

聚赖氨酸明显低沉证明其抗菌活性要强于游离ε

聚赖氨酸。
[0096]
截止如图6所示当初始接种量为105cfu/ml时离子接联

热开辟的ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒抗菌效验明显优于其他处置组。与游离ε

聚赖氨酸(ε

pl)和离子接联的ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒(pg0)比拟离子接联

热开辟的ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒(pg
h
)的抗菌活性更长久。增添纳米颗粒后培养24h后细菌不可长离子接联

热开辟的ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒闭于和尚氏菌有较强的压创造用。
[0097]
实行例4
[0098]
ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒的抗吸湿本领、ph宁静性测定简直包括如下办法:
[0099]
(1)纳米颗粒制备;
[0100]
依如实例1中办法制备ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒粉末。
[0101]
(2)抗吸湿性测定;
[0102]
恒温恒湿箱中安排温度25
±
1℃相闭于湿度(rh)控制在60%。透彻测量ε

聚赖氨酸、阿拉伯胶纳米颗粒pg0和pgh并介入称沉瓶中。分别在放置后的12h、24h、36h、48h不共时间点将样品放入上述烘搞机中测量品质。估计吸湿率:
[0103]
吸湿率(%)=100
×
(mn

m0)/m0。(2)
[0104]
式中:mn是放置恒温恒湿箱n小时后样品沉量;m0是放置恒温恒湿箱前的沉量。
[0105]
如图7、图8所示跟着时间的推移ε

聚赖氨酸(ε

pl)接收的水分越来越多最后引导凝固局面的爆发由粉末状形成块状吸湿率达到87%;阿拉伯胶(ga)具备很强的抗吸湿性在48h时含水率仅为5.3%仍保护搞粉状况;离子接联的ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒(pg0)和离子接联

热开辟的ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒(pg
h
)粉末在不共蕴躲时间后的吸水率与ε

聚赖氨酸和阿拉伯胶存留分别跟着时间的变革在48h时的含水率分别为为13.2%、15.6%。
[0106]
(3)纳米颗粒ph宁静性
[0107]
安排纳米颗粒溶液的ph测定其在不共ph前提下的残留率、粒径、pdi来反应纳米颗粒的宁静性。
[0108]
表4 ph闭于ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒的效率
[0109][0110]
由表4可知ph≥7此后纳米颗粒内的ε

聚赖氨酸开释速率加快在ph=11时ε

聚赖氨酸残留率仅为34.2%而酸性前提下纳米颗粒的残留率仍旧在90%以上;而碱性前提下的pdi普遍大于0.3惟有ph=5时pdi为0.182粒径也最小为203.6nm。
[0111]
实行例5
[0112]
ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒的鱼肉保鲜本领测定简直包括如下办法:
[0113]
(1)纳米颗粒制备;
[0114]
依如实例1中办法制备ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒。
[0115]
(2)鱼肉保鲜试验;
[0116]
经过测定鱼肉中微生物菌降总额的变革、鱼肉脂肪氧化的变革和鱼肉硬度的变革决定鱼肉的凋零情景。鱼肉切成约2g的鱼块埋躲前提为4℃试验组鱼块分别浸渍于1micε

聚赖氨酸、纳米颗粒pg0和pg
h
溶液中闭于照组浸渍于无菌水中。微生物菌降总额采用枯燥涂布计数脂肪氧化运用比色法硬度运用质构仪测定。
[0117]
(3)试验截止;
[0118]
截止如图9所示增添纳米颗粒的处置组的菌降总额在第7天时为5.7log cfu/g仍未胜过水产品中二级品的尺度而游离ε

聚赖氨酸处置组和闭于照组的菌降总额分别为10、7.02log cfu/g已经懊悔脚怪僻鱼肉的尺度;如图10所示闭于照组和游离ε

聚赖氨酸处置组比拟增添纳米颗粒的处置组tbars值分别低沉0.219、0.189mg/kg其鱼肉脂肪氧化的变革更加渐渐;如图11所示闭于照组和游离ε

聚赖氨酸处置组硬度分别低沉123.1n、105.8n增添纳米颗粒的处置组其鱼肉硬度在7天内低沉45.8n。证明离子接联

热开辟的
ε

聚赖氨酸

阿拉伯胶纳米颗粒不妨闭于鱼肉起到必定的防腐保鲜效率。

聚赖氨酸盐酸盐溶解度

聚赖氨酸盐的使用量

聚赖氨酸盐酸盐对身体

聚赖氨酸的使用说明

聚耐氨酸盐酸盐

聚赖氨酸的用量

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