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一种改善畜禽水产动物肠道功能的饲料添加剂的制作方法

来源: 浏览:3次  更新时间:2021-10-28 14:04

一种革新畜禽水产动物肠道功效的饲料增添剂的创造办法

1.本创造属于动物养分、饲料产业范围更简直地波及一种革新畜禽水产动物肠道功效的饲料增添剂。


背景本领:

2.抗菌成长促进剂(agps)不妨促进动物成长保护动物兴盛科技海保护动物兴盛降矮动物患肠道疾病的危害。然而长久运用agps会引导动物体内抗生素残留、细菌耐药性减少、肠道菌群失调、肠道稳态损害以及情况传染等多种倒霉效率已渐渐危及人类食物宁靖。因此在动物饲猜中禁抗已成为必定趋势。尔国已精确决定自2020年7月1日起饲料企业要中止消费含有促进长类药物饲料增添剂(中药类之外)的商品饲料。所以何如样处理因遏止增添抗生素戴来的消费成本减少、畜禽更加幼畜兴盛问题是姑且面对的重要责任。
3.每年因肠道疾病闭于动物消费效率较大比方仔猪痢疾、仔猪胃肠炎、细菌开辟的仔猪腹泻等肠道炎症性疾病是激励仔猪牺牲的重要因素。因此保护动物肠道兴盛是姑且养殖业面对的第一要务。多酚类植物提取物动作一种天然物质属于多羟基酚类物质。因其具备抗氧化、抗炎、抑菌等个性比年来成为行业探究热门之一。如二氢槲皮素、槲皮素、圣草酚以及山奈酚均为酚类物质重要提取自降叶松的根部个中二氢槲皮素、槲皮素因其具备四个酚羟基而具备较强的抗氧化本领。圣草酚以及山奈酚为多酚类提取物具备抗氧化、抗炎的效率。其他二氢槲皮素还具备抗炎、抗病毒、保健的效率比年来还创造二氢槲皮素闭于肝伤害具备缓和效率然而闭于二氢槲皮素保护动物肠道兴盛、缓和肠道炎症的报道较少。
4.因此探究一种不妨保护动物肠道兴盛普及机体抗氧化和免疫本领从而缓和肠道炎症且宁靖、天然、环保的饲料增添剂闭于于动物兴盛养殖和畜禽可持续展开具备沉枢纽理。


本领实行因素:

5.针闭于上述问题克服上述饲料增添剂的缺点和不及本创造供给一种革新畜禽水产动物肠道功效的饲料增添剂。所述饲料增添剂包括植物提取物所述植物提取物以复配的预混料为载体;所述植物提取物包括圣草酚、槲皮素、二氢槲皮素以及山奈酚中的一种大概多种。
6.比方所述的植物提取物为降叶松植物提取物本创造果然了其在制备动物饲料增添剂中的运用及相应饲料在普及动物肠道免疫功效的运用。降叶松植物提取物动作饲料增添剂在革新畜禽水产动物肠道功效包括缓和动物肠道炎症、促进肠道兴盛、普及机体抗氧化和肠道免疫本领中的运用。降叶松植物提取物动作饲料增添剂制备的饲料能缓和动物肠道炎症普及机体抗氧化和肠道免疫本领。
7.本创造是经过下述本领筹备实行的:
8.本创造供给一种革新畜禽水产动物肠道功效的饲料增添剂所述饲料增添剂包括植物提取物所述的植物提取物以复配的预混料为载体;所述植物提取物包括圣草酚、槲皮
素、二氢槲皮素以及山奈酚中的一种大概多种。
9.优选地所述复配的预混料包括矿物元素和微量元素。所述的矿物元素包括锰、铜、铁、锌、硒和碘中的一种大概多种。所述的微量元素包括维生素a、维生素d3、维生素e、维生素k3、维生素b1、泛酸钙、烟酰胺、叶酸、生物素和维生素b
12
中的一种大概多种。
10.本创造供给一种革新畜禽水产动物肠道功效的饲料增添剂所述畜禽水产饲料包括前提饲料和如就任一项所述的饲料增添剂;以所述畜禽水产饲料总品质计所述畜禽水产饲料由99.85wt%~99.95wt%的前提饲料和0.05wt%~0.15wt%的饲料增添剂构成。
11.优选地往日提饲料总品质计所述的前提饲料包括常规饲料和预混料个中常规饲料包括膨化玉米45wt%~50wt%、膨化大豆8wt%~12wt%、去皮豆粕10wt%~15wt%、鱼粉3wt%~5.5wt%、乳清粉8wt%~12wt%、大豆油1wt%~3wt%、碳酸氢钙0.5wt%~0.8wt%、食盐0.2wt%~0.4wt%、石粉0.5wt%~1wt%、氯化胆碱0.05wt%~0.1wt%、蛋氨酸0.1wt%~0.2wt%、赖氨酸0.8wt%~1wt%、苏氨酸0.1wt%~0.4wt%、色氨酸0.05wt%~0.1wt%、蔗糖2.5wt%~3wt%、葡萄糖2.5wt%~3wt%和微晶纤维素4wt%~6wt%。
12.优选地所述前提饲猜中的预混料包括矿物元素和微量元素;所述的矿物元素包括锰、铜、铁、锌、硒和碘中的一种大概多种。所述的微量元素包括维生素a、维生素d3、维生素e、维生素k3、维生素b1、泛酸钙、烟酰胺、叶酸、生物素和维生素b
12
中的一种大概多种。
13.本创造还供给一种如就任一项所述的饲料增添剂在饲猜中的运用所述饲料增添剂在所述饲猜中的浓度为0.05wt%~0.15wt%。
14.优选地所述植物提取物为圣草酚、槲皮素、二氢槲皮素以及山奈酚中的一种大概多种从降叶松根部提取。
15.优选地排行榜从降叶松根部提取。
15.优选地所述饲料运用于畜禽水产动物饲料。
16.优选地依照前提饲料品质计所述的前提饲料包括膨化玉米45wt%~50wt%、膨化大豆8wt%~12wt%、去皮豆粕10wt%~15wt%、鱼粉3wt%~5.5wt%、乳清粉8wt%~12wt%、大豆油1wt%~3wt%、碳酸氢钙0.5wt%~0.8wt%、食盐0.2wt%~0.4wt%、石粉0.5wt%~1wt%、氯化胆碱0.05wt%~0.1wt%、蛋氨酸0.1wt%~0.2wt%、赖氨酸0.8wt%~1wt%、苏氨酸0.1wt%~0.4wt%、色氨酸0.05wt%~0.1wt%、蔗糖2.5wt%~3wt%、葡萄糖2.5wt%~3wt%和微晶纤维素4wt%~6wt%。将植物提取物增添到所述前提饲猜中所述的饲料增添剂在所述饲猜中的浓度为0.05wt%~0.15wt%。
17.进一局面所述饲料动作养殖动物饲料。所述植物提取物包括圣草酚、槲皮素、二氢槲皮素以及山奈酚中的一种大概多种;所述饲料具备缓和动物结肠炎、普及机体抗氧化和肠道免疫本领所述饲猜中含有上述植物提取物。上述植物提取物以饲料增添剂的办法增添于饲猜中。
18.本创造还供给了上述饲料增添剂及制备的饲料在动物中的运用。所述运用在动物所有阶段中均可运用简直展现为可在如下1、2中的大肆一种:
19.1)在普及动物肠道兴盛、安排肠道心理功效、保护肠道稳态普及动物机体抗氧化本领的运用;
20.2)在降矮动物肠道疾病如肠道炎症和肠道伤害革新肠道障碍功效的运用。
21.与现有本领比拟本创造具备以下有益效验:
22.本创造证明上述植物提取物在饲猜中运用效验超过且宁靖无毒副效率。
23.本创造供给的饲料增添剂在革新畜禽水产动物肠道功效中的运用在缓和动物肠道炎症普及动物机体抗氧化程度(如普及抗氧化酶sod、gsh

px、cat的活性)保护动物肠道兴盛减少肠道有益菌(如乳酸杆菌)丰采制止有害菌丰采等方面效验杰出。
24.动作饲料增添剂在动物上使东西备促进长、抗腹泻的效验。
25.本创造供给增添剂为植物提取物具备根源天然、价格矮廉、不易爆发抗药性、无传染等便宜。
附图证明
26.图1表露了植物提取物不妨缓和动物肠道炎症将植物提取物增添到饲猜中饲喂动物采用elisa法检测血清相闭抗氧化目标。不共字母展现分别明显。
27.图2表露了植物提取物缓和动物肠道炎症将植物提取物增添到饲猜中饲喂动物采用elisa法检测血清相闭炎症细胞因子目标。不共字母展现分别明显。
28.图3表露了植物提取物缓和动物肠道炎症将动物结肠构造切片进行h&e染色经过显微镜参瞅植物提取物闭于动物结肠构造病理变革的效率。
29.图4表露了植物提取物闭于动物结肠构造相闭基因表白量的效率不共字母展现分别明显。
30.图5表露了植物提取物闭于动物粪便微生物构成的效率*展现p<0.05;**展现p<0.01;***展现p<0.001。
简直实行办法
31.底下共同简直实行例闭于本创勉强进一步论述然而实行例并不闭于本创造干所有办法的规定。所述办法如无特别证明均为常规办法。所述本料如无特别证明均能从果然贸易道路赢得。
32.实行例1动物饲料的制备
33.(1)制备饲料增添剂和复配的预混料
34.称取1kg植物提取物(二氢槲皮素900g、圣草酚20g、槲皮素50g以及山奈酚30g)增添到9kg预混猜中产生复配的预混料搅拌混共5分钟。个中所述的预混料由矿物元素(锰:40g、铜:20g、铁:140g、锌:140g、硒:0.3g、碘:0.5g)和微量元素(维生素a:18000
×
103iu、维生素d3:4500
×
103iu、维生素e:22.5g、维生素k3:4.5g、维生素b1:4.32g、泛酸钙:33.12g、烟酰胺:41.58g、叶酸:1.764g、生物素:480mg、维生素b
12
:12g)、玉米粉8.54kg构成。
35.(2)制备前提饲猜中的常规饲料:
36.分别称取膨化玉米467.3kg和膨化大豆100kg置于破坏机中破坏混共尔后将破坏混共均匀的混共物经过螺旋上料机传递至混共机而后在混共机中增添预先称取好的去皮豆粕130kg、鱼粉45kg、乳清粉100kg、大豆油20kg、碳酸氢钙5kg、食盐3kg、石粉5.1kg、氯化胆碱0.9kg、赖氨酸8kg、蛋氨酸1.7kg、色氨酸0.8kg、苏氨酸3.2kg、蔗糖25kg、葡萄糖25kg以及微晶纤维素(50kg)本料混共10分钟制得常规饲料。
37.(3)制备增添饲料增添剂的饲料:
38.将办法(2)制得的前提饲料置于混共机中而后在混共机中增添办法(1)所得的含
有植物提取物的复配预混料再混共10分钟;结果用螺旋上料机传至制粒机进行制粒制粒温度为60℃制得颗粒的粒径为2mm制得含有上述植物提取物的饲料养分程度睹表1。
39.以下实行例中仔猪所用饲料为本实行例1制备赢得的含有上述植物提取物的饲料。
40.表1前提饲料的养分程度
41.目标含量总能mcal/kg3.94粗蛋白%18.01钙%0.67总磷%0.54灵验磷kcal/0.39
42.实行例2饲猜中增添上述植物提取物闭于断奶仔猪成长本能和腹泻率的效率
43.1、试验办法
44.考查采用兴盛、成长发育平常、体沉邻近约7.5kg安排的三元杂接断奶仔猪100头随机分成2个组:闭于照组和考查组。闭于照组饲喂不含植物提取物的饲料其他构成比率均普遍每头猪每天饲喂400g。考查组饲喂由实行例1制得的含有上述饲料增添剂的饲料每头猪每天饲喂400g。本考查于2020年10月5日至2020年11月16日在黑龙江某猪场进行考查期42天个中预饲期5天。
45.豢养控制:试验期内依照猪场常规豢养控制步调安排自在采食和饮水并依照猪场的免疫步调进行免疫。
46.目标测定:考查发端和中断时分别于当日饲喂前空肚称沉动作考查初始沉和末沉以反复组为单元留神记录耗料量记录各组腹泻爆发情景估计平稳日增沉、料沉比和腹泻率(表2)。日增沉=(末沉

初始沉)/考查天数;料沉比=平稳日采食量/平稳日增沉;腹泻率=总腹泻率次数/(总头数
×
考查天数)
×
100%)。
47.表2考查截止
[0048] 闭于照组考查组平稳初始沉kg7.537.47平稳末沉kg25.6327.23平稳日增沉g430.95470.48平稳日采食量g659.35682.20料肉比1.531.45腹泻率%11.345.95
[0049]
效验评介:
[0050]
考查过程中参瞅创造与闭于照组比拟考查组表露上述植物提取物具备降矮仔猪腹泻率革新仔猪肠道兴盛的效率。
[0051]
上述截止表露与闭于照组比拟考查组猪的平稳日增沉普及了约39.53g料沉比降矮约0.08;腹泻率降矮了47.53%。证明本创造所得饲料在革新仔猪肠道兴盛预防肠道疾病方面都有较好的效验。
[0052]
实行例3增添上述植物提取物的饲料闭于dss开辟的结肠炎动物血清生化目目标影

[0053]
以下实行例中所用的动物(小鼠)饲料为定制饲料(由北京科奥合力饲料有限公司加工消费的大小鼠保护饲料)以此定制饲料动作前提饲料。简直为:在其消费保护期小鼠饲料时每公斤前提饲料特殊增添1500mg的上述植物提取物(二氢槲皮素1350mg、圣草酚30mg、槲皮素75mg以及山奈酚45mg)提取自降叶松的根部。简直养分因素睹表3。
[0054]
表3前提饲料的养分程度
[0055]
目标含量水分%10粗蛋白%23.07粗脂肪%11.85碳水化合物%65.08总能kcal/g3.40
[0056]
采用3周龄icr小鼠经过一周的符合期后随机分为三组。con组为空白闭于照全程平常饮水(水为蒸馏水)饮水量为4ml/d/只赋予前提饲料。dss组赋予前提饲料考查第15天发端饮用增添3wt%dss的饮水。简直配比办法为:1000ml的蒸馏水中融化30g的dss(葡聚糖硫酸钠盐dextran sulfate sodium salt)。赋予动物连接饮用7天手段在于树立动物溃疡性结肠炎模型尔后换成蒸馏水连接运用2天。tax组全期饲喂由前提饲猜中增添1500mg/kg植物提取物(二氢槲皮素、圣草酚、槲皮素以及山奈酚)的混共物配好后的饲料tax占总品质的比率为0.15%的饲料其他处置共dss组。待考查中断后宰杀十脚动物并取样。简直试验办法和试验截止如下述实行例3

6所述。
[0057]
1、试验办法
[0058]
于考查中断后眼窝采血离心赢得血清采用酶联免疫吸附考查(elisa)办法检测血清中抗氧化目标。所用试剂盒选购自南京建成生物工程探究所。试验办法包括:1)血清样品用心理盐水按体积比1:1、1:4、1:7、1:9、1:14、1:19稀释分别取不共浓度的血清100ul依照安排表进行试验;2)检测血清od值;3)测定后估计制止率(制止率截止在45%

55%之间是最佳取样量)制止率估计公式=(非酶管od值

酶管od值)/非酶管od值*100%;4)经过酶标仪检测相应抗氧化酶的生机。本试验在常规试验室即可完成理想过程。
[0059]
2、试验截止
[0060]
增添植物提取物的饲料闭于动物血清抗氧化目目标测定截止如图1所示。图1表露了植物提取物不妨缓和动物肠道炎症将植物提取物增添到饲猜中饲喂动物采用elisa法检测血清相闭抗氧化目标不共字母展现分别明显。不妨瞅出前提饲猜中增添植物提取物能明显普及血清中超氧化物歧化酶(sod)、过氧化氢酶(cat)以及谷胱甘肽过氧化物酶(gsh

px)的程度明显降矮丙二醛(mda)的程度。
[0061]
实行例4增添植物提取物的饲料闭于dss开辟的结肠炎动物血清炎症细胞因子程度的效率
[0062]
1、试验办法
[0063]
试验所用动物(实行例3宰杀的小鼠)。于考查中断后眼窝采血离心后取血清采用酶联免疫吸附考查(elisa)办法检测动物血清中炎症细胞因子的程度。试验办法包括:1)在预先包强制物相应抗体的包被微孔中顺序介入标品、尺度品、hrp标记的检测抗体经过
温育并实脚清洗。2)用底物tmb显色tmb在过氧化物酶的催化下变化为蓝色并在酸的效率下变化成最后的黄色脸色的深浅和样品中的动物相应炎症细胞因子呈正相闭。3)用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(od值)估计样品的浓度。本试验共样在常规试验室即可完成理想过程。
[0064]
2、试验截止
[0065]
增添植物提取物的饲料闭于动物血清炎症细胞因子相闭目目标测定截止如图2所示。图2表露了植物提取物缓和动物肠道炎症将植物提取物增添到饲猜中饲喂动物采用elisa法检测血清相闭炎症细胞因子目标。不共字母展现分别明显。不妨瞅出前提饲猜中增添1500mg/kg的植物提取物血清中促炎细胞因子白介素

6(il

6)、白介素

1β(il

1β)、白介素

12(il

12)、肿瘤坏死因子

α(tnf

α)以及变化成长因子

α(tgf

α)明显矮于dss组而抗炎细胞因子il

10明显高于dss组。
[0066]
实行例5增添植物提取物的饲料闭于dss开辟的结肠炎动物结肠构造伤害的效率
[0067]
1、试验办法
[0068]
试验所用动物(实行例3宰杀的小鼠)。取动物的结肠构造置于4%的多聚甲醛(以品质百分比计将40g多聚甲醛粉末介入60~70℃450ml去离子水中再介入1mmol/l naoh溶液并连接搅拌(滴加)调ph至7.0使其呈清澈状再介入500ml2
×
pbs(磷酸缓冲盐溶液)充溢混匀结果检测ph值过滤后定容至1000ml即为4%多聚甲醛溶液)在配好的4%多聚甲醛中固定过夜采用石蜡包埋后切片并进行h&e染色采用显微镜参瞅结肠构造病理构造并照相。
[0069]
2、试验截止
[0070]
增添植物提取物的饲料闭于动物结肠构造形态的测定截止如图3所示。图3表露了植物提取物缓和动物肠道炎症将动物结肠构造切片进行h&e染色经过显微镜参瞅植物提取物闭于动物结肠构造病理变革的效率。不妨瞅出植物提取物可明显革新结肠病理伤害缩小炎症浸润保护肠道上皮构造完备。
[0071]
实行例6增添植物提取物的饲料闭于dss开辟的结肠炎动物结肠构造炎症细胞因子、肠道障碍以及nf

κb旗号通路相闭基因表白量的效率
[0072]
1、试验办法
[0073]
试验所用动物(实行例3宰杀的小鼠)。宰杀理想动物取动物结肠构造

80℃保持。取

80℃冰箱冻存的结肠构造试验办法如下:1)每个离心管增添构造样、钢珠以及1ml的trizol混共置于匀浆机中匀浆;2)匀浆后介入200μl氯仿摇摆后停止10min离心(12000rpm4℃10min);3)取上层无色液体(构造提取出的rna)200μl移入新的1.5ml ep管中;3)在ep管中再介入等体积的异丙醇振动摇匀静置15min后离心(12000g4℃15min);4)去除异丙醇介入75%depc乙醇1ml振动30s后离心(8000g4℃10min)反复2次;5)搞燥加0.1%depc水振动运用nanodrop超微量分光光度计测定rna浓度尔后配平保护浓度普遍;6)运用pcr仪去除dna介入gdna eraser 1μl5
×
gdna eraser 2μldnase free h2o eraser 3μl样品4μl。试验前提为:42℃2min降到4℃进行若搞个轮回;7)运用pcr仪回转至cdna模板介入primer script rt enzyme mix 1μl5
×
primer script buffer 4μlrt primer mix 4μlrnase free h2o 1μl。试验前提为:37℃15min(85℃)5s(4℃)进行若搞个轮回;8)经过primer 5软件安排基因(il

1β、il

6、tnf

α、il

10、zo

1以及
occludin)的引物;9)依据试验乞求将所需引物稀释成10μm的溶液(摆设比率为:20μl引物+180μl depc水)离心后备用;10)离心后的样品经过y062荧光定量pcr检测结肠构造相闭基因的相闭于表白量(本理为:以基因的cdna为模板进行pcr扩增在pcr扩增过程中经过收集荧光旗号闭于pcr过程进行及时检测。因为在pcr扩增的指数时期模板的ct值和该模板的开始拷贝数存留线性闭系所以赢得的是基因的相闭于定量值)。
[0074]
2、试验截止
[0075]
增添植物提取物的饲料闭于动物结肠构造相闭基因表白量的测定截止如图4所示。图4表露了植物提取物闭于动物结肠构造相闭基因表白量的效率不共字母展现分别明显。不妨瞅出前提饲猜中增添1500mg/kg的植物提取物明显降矮了p65和nf

κb基因mrna的表白量制止nf

κb旗号通路进一步制止促炎细胞因子il

1β、il

6以及tnf

α基因mrna的表白量普及抗炎细胞因子il

10基因mrna的表白量。其他植物提取物还可革新肠道障碍功效与dss组比较饲猜中增添植物提取物减少zo

1和occludin基因mrna的表白量。
[0076]
实行例7增添植物提取物的饲料闭于dss开辟的结肠炎动物粪便微生物构成的效率
[0077]
1、试验办法
[0078]
试验所用动物(实行例3宰杀的小鼠)。宰杀前收集理想动物怪僻粪便于

80℃冷冻保持。取

80℃冰箱冻存的动物粪便样品采用16s rrna基因测序本领领会动物粪便微生物的百般性。试验办法如下:1)用1wt%琼脂糖凝胶检测dna的品质并用nanodrop 2000紫外瞅来分光光度计闭于dna进行定量。运用引物闭于338f(5'

actcctacgggaggcagcag

3')和806r(5'

ggactachvgggtwtctaat

3')经过pcr扩增细菌16s rrna基因的v3

v4高变区。2)从2wt%的琼脂糖凝胶中提取pcr扩增产品并依据创造商的证明运用axyprep dna凝胶提取试剂盒进行纯化。3)定量和纯化后闭于扩增子进行测序。本试验经过illumina miseq平台直接测序。
[0079]
2、试验截止
[0080]
增添植物提取物的饲料闭于动物粪便微生物的效率截止如图5所示。图5表露了植物提取物闭于动物粪便微生物构成的效率*展现p<0.05;**展现p<0.01;***展现p<0.001。不妨瞅出在属程度上前提饲猜中增添1500mg/kg的植物提取物有益菌乳酸菌属和杜氏杆菌属的丰采减少而拟杆菌属的丰采低沉。
[0081]
须要证明的是依照本创造上述各实行例本范围本领人员是实脚不妨实行本创造独力权利乞求及隶属权利的理想范畴的实行过程及办法共上述各实行例;且本创造未留神论述局部下于本范围公知本领。
[0082]
以上所述仅为本创造局部简直实行办法然而本创造的保护范畴并不限制于此所有熟悉本范围的人员在本创造揭穿的本领范畴内可容易料到的变革大概替代都应涵盖在本创造的保护范畴之内。

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